MIO medium fundament, forberedelse og brug

den halv MIO er en biokemisk test, der bruges til at identificere arter af bakterier, der tilhører familien Enterobacteriaceae. Det er ret nærende og består af glucose, gærekstrakt, pepton, triptein, L-ornithinhydrochlorid, bromcresolpurpur og agar.

Betydningen af ​​dens akronym (MIO) beskriver hver af de parametre, der kan observeres i dette medium; motilitet, indol og ornithin. Motilitet er mikroorganismens evne til at bevæge sig ved tilstedeværelsen af ​​flagella. Til denne egenskab kan observeres konsistensen af ​​mediet skal halvfast, så at præparatet tager mindre mængde agar.

Indolproduktionen beviser tilstedeværelsen af ​​tryptophanase-enzymet, der virker på aminosyretryptophanet, idet det er nødvendigt at anvende et afslørende reagens for at gøre indolproduktionen synlig.

Endelig bestemmer ornithin, om bakterien er i stand til at dekarboxylere aminosyren, det vil sige hvis den har enzymet orinithin-decarboxylase.

indeks

• 1 Foundation
  • 1.1 Pepton, gærekstrakt og triptein
  • 1.2 Motilitet
  • 1,3 Glucose
  • 1,4 L-ornithin
  • 1,5 pH indikator
• 2 Frø og udviklingsteknik
• 3 Fremstilling
  • 3,1 MIO Medium
  • 3.2 Kovacs reagens (indol test udvikler)
• 4 Brug
• 5 Kvalitetskontrol
• 6 referencer

fundament

Pepton, gærekstrakt og triptein

Disse elementer bidrager til næringsværdien af ​​dette medium. De tjener som en kilde til næringsstoffer og essentielle aminosyrer til bakteriel udvikling.

Desuden er triptein en kilde til tryptophan til bevis for tilstedeværelsen af ​​enzymet tryptophanase, som nedbryder tryptophan ved hjælp af en reduktiv deamineringsfrigivende indol, pyrodruesyre, ammoniak og energi.

Indol er farveløs, så dens nærvær afsløres ved at tilføje fem dråber Ehrlich eller Kovacs reagens, begge med p-dimethylaminobenzaldehyd.

Aldehydgruppen af ​​denne forbindelse reagerer med indol, hvilket frembringer et ringformet fuchsia-rødt produkt på agaroverfladen.

Eventuelle spor af farve bør betragtes som positive beviser. Testen skal læses straks, fordi efter lidt nedbryder farven.

På den anden side skal denne test afsløres efter at have registreret resultaterne af motilitet og decarboxylering af ornithin..

fortolkning

Positiv test: dannelse af en fuchsia rød ring, når der tilsættes Kovacs reagensdråber.

Negativ test: der er ingen ringformation.

motilitet

Evnen af ​​bakterierne til at bevæge sig vil blive påvist, hvis et uklart medium observeres, eller hvis der er en tykk vækstlinje, der udvider omkring den indledende inokulation.

En negativ motilitetstest vil blive påvist ved at observere en tynd vækstlinje, og rundt omkring vil være uden vækst.

Det er vigtigt, at motiliteten læses, før indoljen afsløres, da tilsætningen af ​​reagenset skyder hele mediet.

I mobile, men langsomt voksende bakterier er det svært at demonstrere deres motilitet med dette medium. I dette tilfælde anbefales det at anvende andre test eller metoder, såsom motilitetsmediet eller drop drop-metoden.

glucose

Glucose er det fermenterbare kulhydrat, der ud over at tilvejebringe energi syrer mediet, en nødvendig betingelse for dekarboxylering af aminosyreornitinen til at forekomme.

Gæringen af ​​glucose bør altid ske, baseret på princippet om, at alle bakterier, der tilhører familien Enterobacteriaceae fermenteringsglucose.

L-ornithin

Hvis bakterien producerer enzymet ornithin-decarboxylase, kan det virke, når mediet er blevet syrnet ved fermentering af glucose.

Enzymetorithin-decarboxylasen virker på carboxylgruppen i aminosyren, der producerer en amin kaldet putresin, der alkaliserer mediet igen.

Denne test skal læses efter 24 timers inkubation, fordi hvis du forsøger at læse, før du kan fejlfortolke testen med et falsk negativt.

Det skal huskes, at den første reaktion, der forekommer, er gæringen af ​​glucose, således at mediet bliver gul i en indledende fase (første 10-12 timer). Hvis decarboxyleringen af ​​ornithin senere opstår, vil mediet blive lilla.

Det er vigtigt at fortolke ornithin-decarboxyleringstesten inden afsløring af indol, da tilsætningen af ​​Kovacs-reagens ændrer mediumets farve.

fortolkning

Negativ test: medium gul eller med gul baggrund.

Positiv test: helt lilla.

PH indikator

I dette tilfælde anvendes bromocresol lilla; Den ansvarlige for at afsløre, når der er en pH-ændring i midten. Når den syrnes, bliver indikatoren gul, og når alkaliseret bliver lilla.

Frø og udviklingsteknik

Udsåningsmediet at Mio et ansa lige eller nål anvendes og med det en del af kolonien opsamles at studere.

En dyb punktering er lavet i MIO medium i en lige linje. Det er ikke tilrådeligt at udføre dobbelt punktering, da det kan give falsk billede af motilitet hvis Braaden udføres ikke på samme sted.

Inkuber i 24 til 48 timer ved 37 ° C i aerobiose. Overhold resultaterne i denne rækkefølge: motilitet, decarboxylering af ornithin og endelig afsløre indolen.

Det anbefales at aseptisk tage 2 ml af mediet, overføre det til et sterilt rør og udføre indolprøven der, så hvis det er negativt, kan resten af ​​det oprindelige rør inkuberes i 24 timer for at afsløre indolen igen.

Udviklingen af ​​indol udføres på følgende måde: 3 til 5 dråber af Kovacs-reagenset tilsættes til MIO-mediumet og omrøres kraftigt. Det observeres, hvis en fuchsia rød ring vises eller ej.

forberedelse

Halv MIO

Vejer 31 g af MIO-mediumet og opløses i en liter destilleret vand.

Varm, indtil blandingen koger i et minut, omrøring ofte, indtil agaren er helt opløst. Fordel 4 ml mediet i 13/100 reagensglas med bomuldslåg.

Steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og lad den stå lige i et stativ på en sådan måde, at der dannes en halvfast blok.

Opbevares i køleskab 2-8 ° C. Tillad til temperament før plantning af bakteriestammen.

Farven på det dehydrerede medium er beige, og det af mediet fremstilles lidt lilla opaliserende.

Den færdige pH-værdi af det fremstillede medium er 6,5 ± 0,2

Mediet bliver gul med sur pH og er lilla ved alkalisk pH.

Kovacs reagens (indol test-udvikler)

Dette reagens fremstilles som følger:

150 ml amyl-, isoamyl- eller butylalkohol (hvilken som helst af de tre) måles. Der opløses 10 g p-dimethylaminobenzaldehyd. Derefter tilsættes 50 ml koncentreret saltsyre langsomt.

Det fremstillede reagens er farveløst eller lysegult. Det skal opbevares i en gule flaske og opbevares i køleskab. En mørk brun farve viser forringelsen.

Også Kovacs-reagenset kan erstattes af Ehrlich-reagenset. Sidstnævnte er mere følsom og foretrækker at afsløre indol i bakterier, der producerer det i små mængder, som i nogle gramnegative ikke-fermenterende baciller og visse anaerober.

brug

Dette medium er en test, der supplerer et batteri af biokemiske test til identifikation af bakterier, der tilhører familien Enterobacteriaceae.

De-carboxylationsdataene for ornithin tjener til at differentiere Shigella sonnei, det giver positivt af Shigella boydii, Shigella flexneri og S. dysenterieae, der giver negativer.

Også i modsætning slægten Klebsiella, som er negativ, slægten Enterobacter, hvor de fleste af sine arter er positiv.

Kvalitetskontrol

Hver gang en batch MIO-medium fremstilles, kan en kontrolprøve udføres. Til dette benyttes kendte eller certificerede stammer til at observere mediumets adfærd.

De stammer der kan bruges er Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes og Proteus mirabilis.

De forventede resultater er E. coli og M. morganii. Dan M: +, I: + og O: +.

Klebsiella pneumoniae giver alle negative (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis og Enterobacter aerogenes dan M: + I: - og O: +.

referencer

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske test til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
4. Laboratorier Britania. MIO Medio 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL Motility Indol Ornithin (MIO) Medium. 2007. Tilgængelig på: bd.com
6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Motilitet, Indol, Ornitin. 2010. Tilgængelig på: andinamedica.com