Halv SIM-fundament, forberedelse og brug

den halv SIM Det er en halvfast og differentiel agar, specielt designet til at hjælpe med at identificere nogle bakterier, primært af familien Enterobacteriaceae. Den består af triptein, pepton, jernsulfat, ammoniumsulfat, natriumthiosulfat og agar.

Dette medium tillader udførelse af tre vigtige tests: produktionen af ​​hydrogensulfid (H₂S), indoldannelse og bevægelighed, dermed akronym SIM. På grund af sin store anvendelighed kan den ikke mangle i et bakteriologilaboratorium.

I modsætning til andre medier skal dette være halvfast, så bevægelseskapaciteten hos nogle bakterier kan påvises. I denne forstand fungerer denne test meget godt for Enterobacteriaceae, men ikke i gramnegative, ikke-fermenterende baciller, hvor det foretrækkes at anvende andre metoder, såsom for eksempel den ventende dråbe.

SIM-mediet gør det muligt at skelne mellem bestemte specifikke egenskaber, som karakteriserer nogle bakterier i forhold til andre. For eksempel Escherichia coli det skelnes ved at være H₂S (-), Indol (+) og bevægelighed (+), mens Proteus mirabilis det er H₂S (+), indol (-), motilitet (+).

indeks

• 1 Foundation
  • 1.1 Strømkilde
  • 1.2 Produktion af hydrogensulfid
  • 1.3 Indol dannelse
  • 1.4 Motilitet
• 2 Fremstilling
  • 2.1 Halv SIM
  • 2.2 Kovac's reagens
  • 2.3 Erlich reagens
• 3 anvendelser
  • 3.1 Frø
• 4 Kvalitetskontrol
• 5 begrænsninger
• 6 referencer

fundament

Det er et kulturmedium, der betragtes som forskelligt, fordi dets anvendelse er i stand til at skelne mellem mikroorganismer, der er i stand til at producere hydrogensulfid fra dem, der ikke gør det; fremhæver også dem, der danner indol fra tryptofan af dem, der ikke danner det, og til sidst adskiller det motile fra de immobile bakterier.

Strømkilde

Som ethvert dyrkningsmedium har det elementer, som giver de nødvendige næringsstoffer, således at ikke-krævende mikroorganismer kan udvikle sig. Disse elementer er repræsenteret af peptonerne og tripteínaen.

Udviklingen af ​​mikroorganismen i miljøet er afgørende for at kunne observere tilstedeværelsen eller fraværet af de karakteristika, der vurderes af dette medium.

Fremstilling af hydrogensulfid

Bogstavet S af akronym SIM refererer til produktion af hydrogensulfid (H₂S). Bakterier, der er i stand til at danne hydrogensulfid, vil tage svovl af natriumthiosulfat.

Når H er dannet₂S - farveløse gasser - dette reagerer med jernsaltet, der er til stede i mediet, hvilket danner ferrosulfid, klart synligt (sort bundfald). Bakterier, der ikke danner H₂S, forlad midten af ​​den oprindelige farve (beige).

Tilstedeværelsen af ​​det sorte bundfald kan forhindre fortolkningen af ​​bevægelighed. Det er imidlertid kendt, at størstedelen af ​​H-producerende enterobakterier₂S er positiv motilitet, såsom Salmonella, Proteus og Citrobacter. Desuden antyder det sorte bundfald, der dækker næsten hele mediet, positiv motilitet.

Indole træning

Det andet bogstav i akronym SIM er "I", hvilket repræsenterer dannelsen af ​​indol.

På den måde opfylder tripteína ud over at være en kilde til næringsstof en anden grundlæggende funktion. Denne pepton er rig på en aminosyre kaldet tryptophan, derfor kan den vise bakterierne, der producerer tryptophanase.

Dette enzym er ansvarligt for klipning af aminosyretryptophanet med den deraf følgende dannelse af indol (farveløst stof), pyrodruesyre og ammonium..

Derfor er det nødvendigt at tilføje et afslørende stof (Ehrlich reagens eller Kovac's reagens) for at demonstrere denne reaktion. Enten reagerer med indolen, der danner et ringformet rødfuksi stof på overfladen af ​​agar. Hvis fuchsia-ringet vises, indoleres testen som positiv.

Bakterier, der ikke har dette enzym, vil ikke danne ringen og tolkes som en negativ indol-test.

Det er vigtigt at påpege, at indolprøven skal være den sidste, der skal fortolkes, da reagensen er tilsat, bliver mediet overskyet, hvilket gør det vanskeligt at visualisere motiliteten.

motilitet

Endelig betyder bogstavet "M" af ordet SIM bevægelighed. For at kunne vurdere motiliteten er dette medium strategisk halvfast, fordi denne egenskab er afgørende for at kunne observere om der er bakteriel bevægelse eller ej. De bakterier, der har flagella, er dem, der giver denne positive test.

En positiv test vil være tydelig, når der observeres turbiditet både i det oprindelige inokulum og omkring det. Selvom ikke-mobile bakterier udvikler sig kun i den indledende inokulumbane.

forberedelse

Halv SIM

Vægt 30 g af det dehydrerede medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Blandingen henstår i 5 minutter og opvarmes derefter til kogning, omrøres ofte, indtil den er helt opløst..

Fordel blandingen i reagensglas med bomuldslåg og autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern rørstativet fra autoklaven og lad det størkne i opretstående position, så mediet er i form af en blok..

Til opbevaring opbevares det i køleskabet, indtil det anvendes. Det fremstillede medium skal have en endelig pH på 7,3 ± 0,2.

I øjeblikket at inokulere mediet skal det være ved stuetemperatur. Farven på mediet er beige.

Kovac's reagens

Mål 150 ml amyl eller isoamyl eller butylalkohol. (Brug en af ​​de tre nævnte).

Opløs 10 g p-dimethylaminobenzaldehyd. Derefter tilsættes langsomt 50 ml koncentreret saltsyre.

Reagenset klar til brug er farveløst eller lysegult. Det bør opbevares i en ravflaske og opbevares i køleskab. Brug ikke, hvis det tager en mørk brun farve; det indikerer at det er beskadiget. Dette reagens foretrækkes ved behandling med enterobakterier.

Erlich-reagens

Afvej 2 g p-dimethylaminobenzaldehyd og opløs i 190 ml absolut ethylalkohol og bland langsomt med 40 ml koncentreret saltsyre. Hold Kovac's reagens på samme måde. Ehrlich reagens anvendes mere til ikke-fermenterende og anaerobe bakterier.

applikationer

SIM-mediumet er meget anvendt i bakteriologilaboratorier. Det har som en fordel, at der i samme rør kan observeres tre væsentlige egenskaber ved identifikationen af ​​Enterobacteriaceae.

plantet

Den korrekte måde at så dette medium på er at bruge nålen, med hvilken en del af den rene koloni, der skal studeres, tages og indsættes midt i mediet lodret. Der skal foretages en enkelt stød. Punktet bør ikke nå bunden af ​​røret, den korrekte ting er at dække kun to tredjedele af dybden.

Det er ikke tilrådeligt at gentage inokulumet, da dette kan føre til falske fortolkninger af positiv motilitet. Det inokulerede medium inkuberes i aerobiose ved 37 ° C i 24 timer.

Afsluttede den tid, det blev observeret, hvis der var eller ikke var produktion af H₂S og bevægelighed er læst. Endelig afsløres indolen, idet der tilsættes 3 til 4 dråber af Ehrlich eller Kovac's reagens, det blandes forsigtigt og tolkes.

Kvalitetskontrol

Som en sterilitetskontrol inkuberes ét eller to rør uden inokulering i en ovn ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes, at efter denne tid vil der ikke være nogen vækst eller farveændring.

Som en kvalitetskontrol kan certificerede kendte stammer anvendes, såsom: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De forventede resultater er: Escherichia coli H₂S negativ, indol og positiv motilitet, Enterobacter aerogenes Kun positiv motilitet, Salmonella typhimurium H₂S og positiv motilitet med negativ indol. Proteus vulgaris alle positive, mens Klebsiella pneumoniae og Shigella sonnei alle negative.

begrænsninger

-Nogle stammer af Morganella morganii, blandt andre stammer kan producere et brunt pigment i dette medium på grund af produktionen af ​​melanin, bør dette ikke forveksles med bundfaldet af jernsulfid. I uerfarne fagfolk kan denne situation generere falske positive i fortolkningen af ​​H-testen₂S.

-Strenge aerobic bakterier vil kun vokse på overfladen af ​​røret, hvilket gør det vanskeligt at fortolke motiliteten.

referencer

1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Tilgængelig på: bd.com
2. Neogen Laboratories SIM Medium. Tilgængelig på: foodafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Tilgængelig på: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab Laboratory SIM Medium. Tilgængelig på: .brizuela-lab.com
5. Laboratorier Britania. SIM Medium. 2015. Tilgængelig på: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave. Editorial Panamericana S.A. Argentina.