Forberedelse af kulturmedier, hvad det består af, mål og trin

den fremstilling af kulturmedier Det er en rutinemæssig metode anvendt i laboratorier til vækst af ønskede mikroorganismer. Kulturmedierne er faste, flydende eller halvfaste præparater, som har alle de næringsstoffer, der er nødvendige for udviklingen af ​​en mikrobiel population.

Generelt er midlerne til at dyrke mikroorganismer rige på proteiner og aminosyrer og indeholder normalt en del, der favoriserer væksten af ​​organismen, som du vil studere, såsom vitaminer, blod, serum, blandt andre..

Der er ikke noget generelt eller universelt kulturmedium, da sammensætningen varierer efter behovene af den interesserede mikroorganisme. Nogle bakterier kan udvikle sig i ethvert kulturmedium, men andre har særlige krav.

indeks

• 1 Hvad består den af??
  • 1,1 agar
  • 1.2 Væsker
  • 1.3 Ekstrakter
  • 1.4 Peptoner
  • 1.5 Støddæmpere
• 2 mål
• 3 Typer af medier
  • 3.1 Baseret på dets sammensætning
  • 3.2 Baseret på typen af ​​mikroorganisme
• 4 trin
• 5 referencer

Hvad består det af??

Mikroorganismer, såsom svampe og bakterier, kan ikke studeres individuelt på grund af deres lille størrelse. Derfor skal de dyrkes i kunstige midler, der muliggør en betydelig stigning i befolkningen.

Hvis vi f.eks. Ønsker at studere bakterier, skal vi give dem de rette forhold, så de kan sprede og danne en koloni (som kan observeres med det blotte øje).

Forberedelsen af ​​kulturmediet varierer meget afhængigt af typen af ​​mikroorganisme, som man ønsker at dyrke. Før du forbereder det, er det nødvendigt at kende de grundlæggende ernæringsmæssige behov i arbejdets krop.

Dernæst beskrives de mest almindelige komponenter i kulturmedier for at få en generel ide om deres forberedelse:

agar

Den bruges i afgrøder som geleringsmiddel og tilføjes, når man søger et fast eller halvfast medium. Det første størkningsmiddel anvendt til fremstilling af medier var gelatine, men i år 1883 blev agar indført i bakteriologiens verden af ​​W. Hesse.

Bakteriologisk agar har som hovedkomponent et polysaccharid af komplekse grene ekstraheret fra alger. Denne forbindelse anvendes som et fortykningsmiddel til almindelige fødevarer, såsom is og syltetøj.

Det er af mange årsager et meget værdifuldt element i mikrobiologi. Hovedårsagen til, at mikroorganismerne ikke kan nedbryde den, flyder ved en temperatur på 100 ° C og forbliver i en flydende tilstand, indtil de når 45 ° C eller mindre.

Hvis du ønsker at fremstille et fast medium agarkoncentration til ca. 1,5% dette, mens det halvfaste fremstilles ud fra 0,3 til 0,5%.

væsker

Dyrkning af patogene organismer kræver kropsvæsker, så de kan udvikle sig som de ville i deres naturlige miljø. Af denne grund tilsættes hel eller defibrilleret blod. Væsken ekstraheres fra et sundt dyr og tilsættes til dyrkningsmediet, når det er steriliseret.

uddrag

De fås fra forskellige dyredele (såsom kød eller lever) eller grøntsager (frø) og forarbejdes til opnåelse af et fast koncentrat i form af pasta eller pulver. De mest almindelige er gær, malt og kød.

Peptonas

Disse organiske forbindelser opnås ved enzymatisk eller kemisk hydrolyse af animalske eller vegetabilske væv. Formålet er at tilføje indhold, der er rigt på aminosyrer, som er de grundlæggende enheder af proteiner.

Støddæmpere

Buffere eller buffersystemer undgår pludselige ændringer i pH og hjælper med at opretholde det optimale område, som kroppen tåler.

De fleste organismer kan udvikle sig korrekt ved en pH på 7, selv om nogle bakterier foretrækker alkaliske medier. Der er dog bakterier, der modstår pH-variationer mellem værdierne 6 og 9.

I arter, der er følsomme for pH, produceres skaden ikke af den store mængde hydrogen eller hydroxylioner, men ved forøgelsen af ​​svage syrer eller baser, som kan trænge ind i cellen.

Også indikatorer for, at pH for at overvåge det og undgå afvigelser forårsaget af fermentering eller andre processer tilsættes.

målsætninger

Hovedformålet med forberedelsen af ​​et kulturmedium er at tilføje alle de nødvendige komponenter for at muliggøre en vellykket udvikling af organismen, der ønsker at blive isoleret. Den mest effektive kombination af komponenter og næringsstoffer skal identificeres for at opnå det ønskede medium.

Både fremstilling og opbevaring af mediet er afgørende for at sikre en vellykket vækst, da disse trin afhænger af sammensætningen af ​​miljøet og tilgængeligheden af ​​næringsstoffer.

Det skal tages i betragtning, at dyrkning af mikroorganismer er en opgave, som påvirkes af flere faktorer uden for kulturmediet, såsom intensiteten af ​​det modtagne lys, temperaturen og niveauet af surhed eller alkalitet i mediet. Derfor skal hver af disse variabler tages i betragtning.

Typer af medier

Baseret på dets sammensætning

Baseret på dets sammensætning er der tre hovedtyper af afgrøder: naturlige eller empiriske, semisyntetiske og definerede syntetiske eller kemiske midler.

Naturmiljø

I naturlige miljøer er den nøjagtige sammensætning ukendt. Disse omfatter ingredienser som mælk, fortyndet blod, grøntsagssaft, ekstrakter og infusioner af kød og pepter. Af økonomiske grunde er lavkostkomponenter ofte tilsat såsom sojaekstrakt, valle, melasse osv..

Semisyntetiske medier

Den hedder semi-syntetisk medium, hvis sammensætningen af ​​det er delvist kendt. Ethvert medium indeholdende agar bliver et halvsyntetisk medium.

Blandt dem har vi papa dextrose agar, czapek-dox agar, havre agar, pepton kød agar, blandt andre eksempler.

Syntetisk eller kemisk defineret medium

I dette tilfælde er sammensætningen af ​​mediet - hvad angår mængden af ​​kulstof, nitrogen, svovl, fosfor og andre vækstfaktorkilder - fuldt kendt. Det er meget nyttigt, hvis du ønsker at få reproducerbare resultater for andre forskere.

For de såkaldte "mikroorganismer med særlige vækstkrav" er det nødvendigt at tilføje de nødvendige komponenter. Et eksempel på denne type er Lactobacillus.

Baseret på typen af ​​mikroorganisme

Tilsvarende er der en anden klassificering for kulturmedier baseret på den type mikroorganisme der kan vokse i den. Efter dette princip har vi følgende generelle berigelsesmetoder, selektive og differentielle. Hver er beskrevet nedenfor:

Generelt betyder

Disse indrømmer udviklingen af ​​en lang række mikroorganismer. Hvis en organisme har brug for særlige betingelser for sin vækst, vil det ikke være i stand til at udvikle sig vellykket i denne type afgrøde.

Berigelse betyder

Anrikningsmidlerne favoriserer væksten af ​​en bestemt type mikroorganismer, men der er ikke tilsat noget stof for at forhindre andre former for mikrober i at vokse i den..

Selektive medier

De ser efter den specifikke vækst af en mikroorganisme, kald det svampe, bakterier, protozoer, blandt andre. For at gøre dette hæmmer de udviklingen af ​​andre.

For at opnå dette mål kan der tilføjes dødelige kemiske forbindelser til en stor gruppe af mikroorganismer og harmløse for den interesserede organisme eller tilføje energikilder, som kun kan assimileres af mikrobogen.

Selektive medier anvendes, når der tages medicinprøver for at dyrke en patogen mikroorganisme. Her er det nødvendigt at favorisere væksten af ​​patogenet og hæmme udviklingen af ​​den normale mikrobielle flora fra patienten.

Bismuthsulfitagar, tillader f.eks. Ikke væksten af ​​gram-positive bakterier og et stort antal bakterier, der findes i mave-tarmhulen. Derfor er det vant til at dyrke de gram-negative bakterier, der forårsager tyfusfeber, Salmonella typhi i fækale prøver.

Forskellige medier

Denne type anvender et diagnostisk træk ved organismen af ​​interesse (ejendommeligheder i deres metabolisme, for eksempel) til identifikation mod en art som vokser i det samme medium.

Både differentierede medier og selektive medier er meget nyttige inden for klinisk mikrobiologi og folkesundhed, da disse discipliner skal påvise tilstedeværelsen af ​​specifikke mikroorganismer relateret til dårlige hygiejneforhold eller -betingelser..

Indikatorstoffer kan tilsættes til afgrøden, som giver et karakteristisk karakteristika for den ønskede koloni. For eksempel tilsættes agar-eosin-methylenblåt (forkortet EMB) og MacConkey-agar med lactose og en pH-indikator.

Når en koloni er udviklet i disse medier med evnen til at fermentere lactose og producere aldehyder, kan de således observeres i en særlig farve.

trin

I øjeblikket kan kulturmedierne købes i lyofiliseret form. Derfor tilrettelægges præparatet, og kun produktet rehydreres. Indholdet skal vejes (under hensyntagen til den endelige mængde, du vil forberede) og opløst i destilleret vand efter alle indikationer på produktet.

Indholdet af flydende medier skal opdeles i de ønskede beholdere (petriskåle, rør osv.) Til efterfølgende sterilisering. For at fordele det faste medium er det nødvendigt at smelte det ved hjælp af en mikrobølgeovn eller ved at udsætte materialet for et vandbad. Mediumets pH skal justeres.

Normalt anvendes agar i reagensglas eller i petriskåle. Hvis agar størkner i en skrånende stilling med den passende vinkel, så den endelige endekant er diagonal, er dette arrangement kendt som fløjtstop eller skråtstillede rør. Når agar størkner i fuld lodret stilling kaldes den "dyb".

Efter sterilisering af medierne - ved hjælp af en autoklave - får de afkøle. Disse skal håndteres i et miljø uden mikroorganismer, det mest almindelige er at arbejde med en tændt lighter, der sikrer et aseptisk miljø i nærheden.

referencer

1. Celis, J. E. (2006). Cellebiologi: en laboratoriehåndbog (Vol. 2). Elsevier.
2. Finegold, S. M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S. M., & Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: mikrobiologisk diagnose. Pan American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Håndbog om mikrobiologi I og II og Parasitologi. Det autonome universitet Ciudad Juárez.
4. Schlegel, H. G., & Zaborosch, C. (1993). Generel mikrobiologi. Cambridge University Press.
5. Tortora, G.J., Funke, B.R., og Case, C.L. (2007). Introduktion til mikrobiologi. Ed. Panamericana Medical.