Nephelometry i hvad det består og applikationer
den nephelometri består i måling af stråling forårsaget af partikler (i opløsning eller i suspension) og måler således strømmen af den spredte stråling i en anden vinkel end retningen af den indfaldende stråling.
Når en partikel i suspension nås af en stråle af lys, er der en del af det lys, der reflekteres, en anden del absorberes, en anden del omdirigeres og resten overføres. Det er derfor, at når lyset rammer et gennemsigtigt medium, hvori der er en suspension af faste partikler, ses suspensionen overskyet.
indeks
- 1 Hvad er nephelometri??
- 1.1 Dispersion af stråling med partikler i opløsning
- 1,2 Nephelometer
- 1.3 Afvigelser
- 1.4 Metrologiske egenskaber
- 2 applikationer
- 2.1 Påvisning af immunkomplekser
- 2.2 Andre applikationer
- 3 referencer
Hvad er nephelometri??
Dispersion af stråling med partikler i opløsning
I det øjeblik, hvor en stråle af lys rammer partiklerne af et stof i suspension, ændrer strålingsretningen sin retning. Denne effekt afhænger af følgende aspekter:
1.Dimensioner af partiklen (størrelse og form).
2. Suspensionens karakteristika (koncentration).
3. Bølgelængde og intensitet af lys.
4. Afstand af hændelseslys.
5. Detektionsvinkel.
6. Brekningsindeks for mediet.
nefelometer
Nephelometeret er et instrument, der bruges til at måle partikler suspenderet i en flydende prøve eller i en gas. Så en fotocelle placeret i en vinkel på 90 ° i forhold til en lyskilde detekterer strålingen med de partikler, der er til stede i suspensionen.
Også det lys, der reflekteres af partiklerne mod fotocellen, afhænger af partikelets tæthed. Diagram 1 præsenterer de grundlæggende komponenter, der udgør et nephelometer:
En. Strålingskilde
I nephelometri er det meget vigtigt at have en strålingskilde med høj lysudgang. Der er forskellige typer, der spænder fra xenonlamper og kviksølvdamper, wolfram halogenlamper, laserstråling, blandt andre.
B. Monokromatorsystem
Dette system er placeret mellem strålingens og kuvetternes kilde, således at forekomsten på strålekuvuetten med forskellige bølgelængder i sammenligning med den ønskede stråling undgås.
I modsat fald vil fluorescensreaktioner eller varmeffekter i opløsningen medføre afvigelser fra måling.
C. Læsning af kuvette
Det er en generelt prismatisk eller cylindrisk beholder, og kan have forskellige størrelser. I denne er løsningen i undersøgelsen.
D. detektor
Detektoren er placeret i en bestemt afstand (normalt meget tæt på tanken) og er ansvarlig for at detektere strålingen dispergeret af suspensionens partikler.
E. Læsesystem
Generelt er det en elektronisk maskine, der modtager, konverterer og behandler data, som i dette tilfælde er målene opnået fra undersøgelsen udført.
afvigelser
Hver måling er underlagt en procentdel af fejlen, som hovedsagelig gives af:
Forurenet spande: i kuvetterne reducerer ethvert middel uden for studieopløsningen, som er indenfor eller uden for kyvetten, strålingslyset på stien til detektoren (defekte kuvetter, støv, der er klæbet til væggene på kyvetten).
interferenser: tilstedeværelsen af nogle mikrobielle kontaminanter eller turbiditet spredes strålingsenergien og øger dispersionsintensiteten.
Fluorescerende forbindelser: Disse er forbindelser, der, når de er spændt af indfaldende stråling, forårsager fejlagtige og høje aflæsninger af dispersionsdensiteten.
Bevaring af reagenser: systemets utilstrækkelige temperatur kan forårsage uønskede betingelser for undersøgelsen og tilskynde tilstedeværelsen af uklare reagenser eller bundfald.
Fluktuationer i elektrisk strøm: For at undgå, at indfaldende stråling er en fejlkilde, anbefales spændingsstabilisatorer til ensartet stråling.
Metrologiske egenskaber
Da strålingsstrømmen af den detekterede stråling er direkte proportional med partiklernes massekoncentration, har nephelometriske undersøgelser - teoretisk - en højere metrologisk følsomhed end andre lignende metoder (såsom turbidimetri).
Desuden kræver denne teknik fortyndede opløsninger. Dette gør det muligt at minimere både absorptions- og refleksionsfænomener.
applikationer
Nephelometriske undersøgelser indtager en meget vigtig position i kliniske laboratorier. Applikationerne spænder fra bestemmelsen af immunoglobuliner og proteiner af akut fase, komplement og koagulation.
Påvisning af immunkomplekser
Når en biologisk prøve indeholder et antigen af interesse, blandes det (i en bufferopløsning) med et antistof til dannelse af et immunkompleks.
Nephelometri måler mængden af lys, som er spredt af antigen-antistofreaktionen (Ag-Ac), og på denne måde påvises immunkomplekser.
Denne undersøgelse kan udføres ved to metoder:
Slutpunktets nephelometri:
Denne teknik kan anvendes til analyse af endepunktet, hvor antistoffet af den undersøgte biologiske prøve inkuberes i 24 timer.
Ag-Ac-komplekset måles under anvendelse af et nephelometer og mængden af spredt lys sammenlignes med den samme måling udført før dannelsen af komplekset.
Kinetisk nephelometri
I denne metode overvåges kompleksdannelsens hastighed kontinuerligt. Reaktionshastigheden afhænger af koncentrationen af antigenet i prøven. Her tages målingerne som en funktion af tiden, så den første måling tages på tidspunktet "nul" (t = 0).
Den kinetiske nephelometri er den mest anvendte teknik, da undersøgelsen kan udføres om 1 time i forhold til den lange tidsperiode for endepunktmetoden. Dispersionsforholdet måles lige efter tilsætning af reagenset.
Så længe reagenset er konstant, anses mængden af antigen, der er til stede, derfor direkte proportional med forandringshastigheden.
Andre applikationer
Nephelometri anvendes generelt i vandkemisk kvalitetsanalyse til bestemmelse af klarhed og styring af behandlingsprocesserne.
Det bruges også til at måle luftforurening, hvor koncentrationen af partiklerne bestemmes ud fra den dispersion, de producerer i et indfaldende lys..
referencer
- Britannica, E. (s.f.). Nephelometri og turbidimetri. Gendannet fra britannica.com
- Al-Saleh, M. (s.f.). Turbidimetri & Nephelometri. Hentet fra pdfs.semanticscholar.org
- Bangs Laboratories, Inc. (s.f.). Gendannet fra technochemical.com
- Morais, I. V. (2006). Turbidimetrisk og nephelometrisk strømningsanalyse. Hentet fra repositorio.ucp.p
- Sasson, S. (2014). Principper for nephelometri og turbidimetri. Hentet fra notesonimmunology.files.wordpress.com
- Stanley, J. (2002). Essentials of Immunology & Serology. Albany, NY: Thompson Learning. Hentet fra books.google.co.ve
- Wikipedia. (N.D.). Nephelometri (medicin). Hentet fra en.wikipedia.org