Baird Parker Agar fundament, forberedelse og brug



den Baird Parker agar det er et solidt, selektivt og differentieret kulturmedium. Det blev oprettet i 1962 til detektion og koagulase-positiv Staphylococcus tælling (Staphylococcus aureus).

Det består af kasein pankreatisk hydrolysat, kødekstrakt, gærekstrakt, lithiumchlorid, glycin, natriumpyruvat, kaliumtellurit, agar og æggeblommeemulsion.

Baird Parker agar er baseret på evnen hos S. aureus at reducere tellurit og producere lecithinase. Begge egenskaber danner en koloni med specifikke egenskaber for denne art. Derfor giver den stor effektivitet ved påvisning af denne mikroorganisme.

De typiske kolonier af S. aureus de er sort eller mørkegrå, med en farveløs kant og en klar halo, der omgiver dem, og adskiller sig fra resten af ​​mikroorganismerne. Dette patogen kan findes i kliniske prøver, vand, kosmetik og rå eller kogte fødevarer.

Dens diagnose eller detektering er meget vigtig på grund af de forskellige patologier, det producerer, såsom madforgiftning, skoldet hudsyndrom, giftigt shocksyndrom, abscesser, meningitis, septikæmi, endokarditis, blandt andre..

indeks

  • 1 Foundation
    • 1.1 Ernæringsmæssig kraft
    • 1.2 Selektiv
    • 1.3 Differential
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 æggeblomme emulsion
    • 2,2 kalium tellurit ved 1% w / v
    • 2.3 Fremstilling af dyrkningsmediet
  • 3 Brug
    • 3.1 Kliniske prøver
    • 3.2 Madprøver
    • 3.3 Vandprøver
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 anbefalinger
  • 6 referencer

fundament

Nærende kraft

Kasein pankreatisk hydrolysat, kødekstrakt og gærekstrakt er kilderne til næringsstoffer, vitaminer og mineraler, der er nødvendige til generel mikrobiell udvikling, mens pyruvat og glycin er forbindelser, der favoriserer den specifikke vækst af Staphylococcus aureus.

selektiv

Baird Parker agar er selektiv, fordi den indeholder stoffer, der hæmmer væksten af ​​den ledsagende flora, samtidig med at udviklingen af S. aureus. De hæmmende forbindelser er lithiumchlorid og kaliumtellurit.

forskellen

Dette betyder, at man kan differentiere S. aureus af resten af ​​de koagulase negative Staphylococci. S. aureus har evnen til at reducere tellurit til sort metallisk fri tellurium, der danner sorte eller mørkegrå kolonier.

Ligeledes giver æggeblommen substraterne til bevis for tilstedeværelsen af ​​enzymet lecithinase og lipase. S. aureus det er positiv lecithinase, og derfor vil der blive observeret en klar halo omkring kolonien, hvilket indikerer at lecithinet blev hydrolyseret.

I denne forstand indikerer udseendet i dette agar af sorte eller mørke grå kolonier, der er lyse med lys halo omkring, tilstedeværelsen af S. aureus. 

Hvis der dannes en udfældningszone, er det vejledende, at der er lipaseaktivitet. Nogle stammer af S. aureus de er positive lipase og andre negative.

I tilfælde af at S. aureus Hvis lipasen er positiv, vil der blive observeret en uigennemsigtig zone omkring den sorte eller mørkegrå koloni, og derefter den klare halo på grund af virkningen af ​​lecithinase..

Andre kolonier af bakterier end S. aureus kunne vokse i dette medium vil udvikle farveløse eller brune kolonier uden halo rundt.

Atypiske sorte kolonier kan også observeres med eller uden en farveløs grænse, men uden en klar halo. Disse kolonier bør ikke tages i betragtning, de svarer ikke til S. aureus.

forberedelse

Æggeblomme emulsion

Tag et frisk kyllingæg, vask det godt og sæt det 2 til 3 timer i 70% alkohol. Derefter åbner ægget aseptisk, og ægget er forsigtigt adskilt fra æggeblommen. Derefter tages 50 ml af æggeblommen og blandes med 50 ml steril fysiologisk opløsning.

Kaliumtellurit ved 1% vægt / volumen

Nogle kommercielle huse sælger 1% kalium tellurit klar til brug. Det tilsættes til mediet, inden mediet størkner.

For at forberede denne opløsning i laboratoriet vejer 1,0 g kaliumtellurit og opløses i en del af vandet. Derefter fuldføres mængden af ​​vand til 100 ml. Opløsningen skal steriliseres ved filtreringsmetoden.

Fremstilling af dyrkningsmedium

Afvej 60 g af det dehydrerede medium og opløs i 940 ml destilleret vand. Lad blandingen stå i ro i ca. 5 til 10 minutter.

Påfør varme ved at omrøre mediet ofte for at forbedre opløsningsprocessen. Lad koge i et øjeblik. Steriliseres i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Lad stå, indtil den når en temperatur på 45 ° C, og tilsæt 50 ml æggeblommeemulsionen og 10 ml 1% tellurit. Bland godt og tjen 15 til 20 ml på sterile petriskåle.

Tillad at størkne, bestil inverteret i plaquers og opbevar i køleskab indtil brug.

Den færdige pH-værdi af det fremstillede medium bør være ved 6,8 ​​± 0,2.

Inden du plantes en prøve, skal du vente, indtil pladen tager omgivelsestemperaturen. Så pladerne ved stribning eller ved at så på overfladen med Drigalski spatel.

Farven på det dehydrerede medium er let brun, og farven af ​​det fremstillede medium er lys rav.

brug

Kliniske prøver

Kliniske prøver udsås direkte ved udledning af en del af materialet i den ene ende af pladen, og derfra striber den ved udmattelse. Inkubér i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Madprøver

Væg 10 g af fødeprøven og homogeniser i 90 ml 0,1% peptoniseret vand, fortyndinger fremstilles derfra, om nødvendigt. Inokulér pladerne i triplicat med 0,3 ml af de fremstillede opløsninger og så på overfladen med en Drigalski-spatel. Inkubér i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Denne metode gør det muligt at tælle de opnåede typiske kolonier og er ideel, når tilstedeværelsen af S. aureus over 10 CFU pr. g / ml prøve.

Hvis du har mistanke om, at mængden af S. aureus den er lille eller der er en masse ledsagende flora, foreslås det at berige prøven i tripticase soy bouillon med 10% NaCl og 1% natriumpyruvat. Dette vil favorisere væksten af S. aureus og vil hæmme udviklingen af ​​den ledsagende flora. Rør, der er overskyet, vil blive podet på Baird Parker agar.

Vandprøver

I et vakuumfiltreringssystem og steriliseret filtreres 100 ml vand, og den mikroporøse membran med 0,4 μm fjernes med en steril klemme og anbringes på en Baird Parker-plade. Inkubér i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C. Denne teknik gør det muligt at tælle typiske kolonier af S. aureus.

Kvalitetskontrol

For at evaluere kvaliteten af ​​Baird Parker agar kan der anvendes kendte stammer, såsom Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

I tilfælde af stammer af S. aureus ATCC er kendt for at reducere tellurit, og de er positiv lipase og lecithinase. Derfor skal der være en tilfredsstillende udvikling og vokse konvekse kolonier med sort center og farveløs kant med en uigennemsigtig halo og en anden halo mere ekstern klar.

På den anden side S. epidermidis dårlig udvikling forventes i dette medium, med gråbrune til sorte kolonier, ingen klar halo.

til E. coli og P. mirabilis Det forventes at være helt eller delvis hæmmet. Ved voksning udvikles brune kolonier uden uigennemsigtig zone eller klar halo.

anbefalinger

-Mediet bør ikke opvarmes efter tilsætning af telluritten og æggeblommen.

-Fremstillingen af ​​æggeblommeemulsionen og dens tilsætning i mediet er et meget sårbart forureningsforløb. Ekstrem forsorg skal tages.

-Hvis der er tilstedeværelse af typiske kolonier af S. aureus skal bekræftes ved at montere en koagulasetest på nævnte stamme.

-Hvis der er tvivlsomme resultater med koagulase, skal andre bekræftende tests monteres.

-Pas på ikke at forvirre tilstedeværelsen af ​​typiske kolonier af S. aureus med de atypiske kolonier af sort farve.

referencer

  1. Wikipedia bidragsydere. Baird-Parker agar. Wikipedia, den frie encyklopædi. 15. marts 2017, 19:36 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org/ Åbnet 18 februar 2019.
  2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Tilgængelig på: bd.com
  3. Laboratorier Britania. Baird Parker agar base. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Tilgængelig på: http://f-soria.es/Inform
  5. Laboratorier Britania. Kalium tellurit. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying Staphylococcus aureus enterotoxigenic type A, i nasopharyngeal smears i food handlers. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
  7. Venezuelansk Standard Covenin 1292-89. (1989). Fødevarer. Isolering og tælling Staphylococcus aureus. Fås i:sencamer.gob.ve