Agar BHI fundament, forberedelse og brug



den BHI agar eller hjernehjerte infusion agar er et nærende fast dyrkningsmedium. På spansk henviser vi til det som hjernehjerte infusionsagar. Det er et ikke-selektivt kulturmedium, hvilket betyder, at alle typer af Gram-positive og Gram-negative bakterier kan udvikles, såvel som nogle gær- og filamentøse svampe.

Det er sammensat af kalvekern hjerne og hjerte infusion, peptisk hydrolysat af animalsk væv, kasein pankreatisk hydrolysat, natriumchlorid, glucose, dinatriumphosphat og agar.

Det skal bemærkes, at BHI agar er et af de hyppigste kulturmedier i bakteriologilaboratorier. Det kan bruges uden kosttilskud som primærkultur, subkultur af kolonier opnået i andre selektive medier eller til vedligeholdelse af stammer i laboratoriet.

På den anden side er det et ideelt medium, der skal anvendes som base i fremstillingen af ​​berigede medier, såsom blodagar og chokoladeagar. Begge ideer til at isolere krævende mikroorganismer fra ernæringsmæssigt synspunkt. Det skal imidlertid tages i betragtning, at da det indeholder glucose, er det ikke tilstrækkeligt at observere hæmolysemønstrene.

Ligeledes kan BHI-agar anvendes til fremstilling af særlige midler til isolering af patogene mikroorganismer med svær vækst i almindelige medier, blandt dem: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae og Histoplasma capsulatum.

Med antibiotikumadditivet bliver BHI-agar et selektivt medium til isolering af svampe.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 kiler
    • 2.2 plader
    • 2.3 Fremstilling af blodagar
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Brug uden kosttilskud
    • 3.2 Som base agar til fremstilling af andre medier
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 referencer

fundament

Det er et nærende kulturmedium til at isolere moderat krævende mikroorganismer, at kunne øge dens berigelse med tilsætning af blod og andre kosttilskud.

Det er et ikke-selektivt kulturmedium, derfor tillader det vækst af de fleste Gram-positive og Gram-negative bakterier samt nogle svampe. Det kan imidlertid blive selektivt med tilsætning af antibiotika.

Mediet indeholder infusion af kalvhjerne og hjerte, peptidhydrolysat fra animalsk væv og kasein pankreatisk hydrolysat; alle disse forbindelser fungerer som kilder til vitaminer, aminosyrer, nitrogen og kulstof.

Glukose er et kulhydrat, der giver energi til mikroorganismer, når de har gæret det. Mens natriumchlorid og dinatriumphosphat opretholder den osmotiske ligevægt og giver en pH tæt på neutralitet. Endelig giver agaren den faste konsistens til mediet.

forberedelse

Afvej 52 gram af dehydratiseret medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Bring blandingen til en varmekilde, indtil den koger under omrøring ofte under opløsningsprocessen.

Du kan tilberede kiler eller plader af BHI agar uden tilsætningsstoffer.

klodser

Til fremstilling fremstillingen kiler tjener til at fylde halvdelen af ​​hvert rør, dække og autoklaveret ved 121 ° C i 15 minutter, begyndende på en basis seng indtil fast stof. Derefter opbevares i køleskab indtil brug.

plader

Den opløste blanding autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter, når den efterlader det afkøles til 50 ° C, og 20 ml af mediet serveres i sterile petriskåle. De får lov at størkne, invertere og opbevare i køleskab, indtil de anvendes. Lad pladerne tage stuetemperatur før plantningen.

Mediumets pH bør være 7,4 ± 0,2.

Det uforberedte medium er beige og tilberedt er lysegult.

Fremstilling af blodagar

Efter sterilisering af mediet, afkøling til en temperatur på ca. 45 til 50 ° C, tilsæt derefter blod (50 ml), bland forsigtigt og tjener til at homogenisere aseptisk 20 ml i hver petriskål. Hvis der dannes bobler på pladen, skal brænderens flamme hurtigt passere over boblerne for at fjerne dem.

På samme måde kan specielle medier fremstilles ved at tilsætte de tilsvarende additiver, når blandingen når en temperatur på 45 til 50 ° C.

Mediet er kirsebærrødt.

applikationer

Brug uden kosttilskud

BHI-agar uden tilsætningsstoffer er nyttig som en primærkultur og til plantning af rene stammer af mikroorganismer, der er medium eller moderat krævende for senere identifikation.

Som betyder lys farve, er ideel til at se pigmenter og indeholder heller ikke interfererende stoffer kan udføres på ham nogle biokemiske tests såsom oxidase og katalase, eller montere andre biokemiske tests fra kolonier fra denne agar.

På samme måde anvendes BHI agar kiler i vid udstrækning til vedligeholdelse af stammer for en bestemt tid i laboratoriet (bakterioteca).

Pladerne eller kilerne plantet på overfladen med bakteriestammer inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer. Mens i svampe afhænger temperaturen og inkubationstiden af ​​den type svamp, der søges.

Som base agar til fremstilling af andre medier

Med denne base kan fremstilles berigede og selektive medier.

beriget

Dens hovedfunktion er at tjene som grundlag for forberedelsen af ​​blodagar til rutinemæssig anvendelse i mikrobiologilaboratorier. Især bidder BHI-basen til isolering af stammer af Streptococcus sp. Imidlertid har den ulempen ved ikke at være egnet til observation af hæmolysemønstre, fordi den indeholder glucose.

Det bruges også til fremstilling af kanin eller hest blod agar til isolering af Haemophilus sp. For bedre resultater kan du tilføje et berigelses supplement (IsoVitaleX).

Hvis prøverne kommer fra luftvejene til agar, kan bacitracin tilsættes for at inhibere den ledsagende flora og øge sandsynligheden for genvinding af stammerne af Haemophilus sp.

På den anden side kan blodagar (lam eller menneske) fremstilles med telluritcystein til isolering Corynebacterium diphtheriae. Det er ligeledes nyttigt at fremstille kaninblodagar, med tilsætning af cystin og glucose til isolering af Francisella tularensis.

Sædning af blodagarplader udføres ved udmattelse og inkuberes ved 35-37 ° C i 24-48 timer i mikroerofil (5-10% CO)2).

selektiv

Dette medium med tilsætning af antibiotika kan erstatte Sabouraud-agar til isolering af svampe.

Kombinationen af ​​BHI agar med chloramphenicol - gentamicin eller penicillin-, streptomycin og hesteblod er ideel til isolering af Histoplasma capsulatum.

Afhængigt af mikroorganismen, der skal isoleres, anbefales inkubation ved 35-37 ° C eller ved stuetemperatur i aerobiosi. Nogle gange er inkubation nødvendig i begge temperaturområder ved hjælp af 2 plader til dette.

Nogle svampe som Trichophyton mentagrophytes de bør inkuberes ved stuetemperatur i op til 7 dage.

Kvalitetskontrol

Fra hver batch tilberedt anbefales det at inkubere 1 plade eller kile ved 37 ° C i 24 timer og kontrollere, at der ikke er nogen vækst; Især vigtigt ved fremstilling af blodagar, fordi det er et let forurenet medium.

På den anden side kan kvaliteten af ​​mediet evalueres ved at inokulere kendte eller certificerede standardstammer og observere deres udvikling.

I denne forstand at evaluere BHI agar uden tilsætningsstoffer, stammer af Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 eller Candida albicans ATCC 10231. De inkuberes ved 37 ° C i aerobiose i 24 til 48 timer. I alle tilfælde forventes tilfredsstillende vækst.

For at evaluere blodagarpladerne, stammer af  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eller Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriestammer inkuberes ved 37 ° C i mikroaerophilicus i 24 timer, medens svampen inkuberes ved stuetemperatur i et fugtigt kammer i op til 7 dage. I alle tilfælde forventes tilfredsstillende vækst.

referencer

  1. Laboratorier Britania. Hjerneinfusion agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Brain Heart Infusion Agar. 2009.
  4. Neogen laboratorium. Brain Heart Infusion Agar. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar blod: fundament, anvendelser og forberedelse. 2018. Fås hos: lifeder.com.
  6. Wikipedia bidragsydere. Hjernen infusion Wikipedia, den frie encyklopædi. 19. september 2018, 03:58 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org. Adgang til 2. marts 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.