Cetrimida agar foundation, forberedelse, anvendelser



den cetrimidagar eller cetrimid er et selektivt fast dyrkningsmedium, designet til isolering af Pseudomonas aeruginosa. Det er baseret på at fremhæve produktionen af ​​pigmenter, der er karakteristiske for denne art, og blev udviklet fra modifikationen af ​​Tech agar, skabt af King, Ward og Raney.

Den oprindelige formel indeholdt magnesiumchloridsalte, kaliumsulfat, pancreasgelatinefordøjelse og agar-agar. Modifikationen af ​​formlen bestod af tilsætningen af ​​cetrimid (cetyltrimethylammoniumbromid) og glycerol.

Cetrimidagar er nyttig til mikrobiologisk undersøgelse af prøver, hvor tilstedeværelsen af Pseudomonas aeruginosa. Det skal bemærkes, at denne bakterie er af stor betydning, fordi den selv er en del af den normale miljømikrobiota, virker det ofte som et opportunistisk patogen..

Derfor er en af ​​de mest almindelige problemer forårsaget af denne bakterie er nosokomielle infektioner, det vil sige dem, der forekommer inden for hospitalsmiljøet, angribe patienter med depressive immunforsvar.

Desuden, på grund af affiniteten af ​​denne organisme med fugt, hvide mere sårbare forurening de er: åndedrætsværn, medicin, forstøvere, springvand, klimaanlæg, desinfektionsmidler, sæbeopløsninger, injicerbare opløsninger, åbne sår , katetre, urinalkatetre, blandt andre.

I denne forstand er cetrimidagar relevant til at udføre mikrobiologiske kontroller og afgrøder til de tidligere nævnte navne.

indeks

  • 1 Foundation
    • 1.1 Fortolkning
  • 2 Fremstilling
  • 3 anvendelser
  • 4 Frø
  • 5 begrænsninger
  • 6 Kvalitetskontrol
  • 7 referencer

fundament

Cetrimidagar er baseret på mediumets evne til at fremme væksten af P. aeruginosa, stimulere produktionen af ​​deres pigmenter og igen hæmme væksten af ​​andre mikroorganismer.

Disse egenskaber skyldes den funktion, som hver af dens komponenter opfylder. Den foreliggende gelatinepepton tjener som en kilde til nitrogen, vitaminer og mineraler. Glycerol eller glycerin virker som en carbonkilde.

Cetrimid (cetyltrimethylammoniumbromid) er for sin del det stof, der hæmmer væksten af ​​andre bakterier end P. aeruginosa, herunder andre arter, der tilhører samme slægt.

Hæmning forekommer, fordi cetramide fungerer som en kationisk detergent, opnå destabilisere plasmamembranen af ​​de fleste bakterier med undtagelse P. aeruginosa og nogle andre, der klarer at overleve.

På den anden side indeholder den magnesiumchlorid og kaliumsulfat. Disse forbindelser stimulerer fænotypisk udtryk relateret til kapaciteten af Pseudomonas aeruginosa at producere forskellige pigmenter, blandt dem: pyocyanin, pioverdin, piorubin, piomelanin og fluorescein. Endelig indeholder den agar-agar, hvilket giver den solid konsistens.

fortolkning

Fortolkningen af ​​væksten opnået i dette agar fremstilles på følgende måde:

Observere, glatte, runde kolonier med regelmæssige kanter, der producerer blå-grøn, grøn, brun eller rødlige pigmenter, mere frugtagtig lugt emission (aminoacetophenon), er en sandsynlig resultat af tilstedeværelsen af ​​denne bakterie i prøven.

På den anden side er det vejledende for P. aeruginosa Observationen af ​​et lyst gulligt-grønt pigment på kolonierne, når pladen udsættes for ultraviolet lys.

Det skal bemærkes, at hver observeret farve skyldes produktionen af ​​et specifikt pigment. Den blå-grønt pigment svarer til pyocyanin produktion, at pyoverdin grøn, rødlig til piorrubina, brun til grønlig piomelanina og lyse gul-fluorescens under ultraviolet lys til fluorescein.

forberedelse

Afvej 43 g af det dehydrerede medium og opløs i destilleret vand. Tilsæt 10 ml glycerol. Tag blandingen til en varmekilde. Lad koge i et par minutter indtil fuldstændig opløsning.

Autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. Lad stå og servere i sterile petriskåle, når temperaturen er omkring 50 ° C.

Tillad at størkne, invertere, bestille i plaquers og opbevare i køleskab indtil brug. For at plante cetrimidagarplader skal de fjernes fra køleskabet i forvejen og får lov til at tage stuetemperatur..

Den endelige pH af mediet bør være 7,2 ± 0,2.

Farven på det dehydrerede medium er beige, og præparatet er uigennemsigtigt hvidt.

applikationer

Cetrimidagar kan bruges til at plante alle typer prøver, hvor tilstedeværelsen af Pseudomonas aeruginosa. Derfor er det nyttigt på alle områder af mikrobiologi (miljømæssige, industrielle, kliniske, vand og mad).

Det er meget vigtigt at analysere hospitalsmiljøer og kunne anvende korrigerende medieret, da denne mikroorganisme når patienter gennem udstyr, medicin, opløsninger og kontaminerede materialer der er forbrugt af patienten.

På denne måde kan mikroorganismen inficere det nedre luftveje, urinveje og sår hos immunsupprimerede patienter.

Kolonistællinger kan også laves P. aeruginosa i mikrobielle grænsetest.

plantet

Cetrimidagar kan anvendes som primærkultur. Pladen inokuleres i en af ​​kanterne og derfra fordeles den ved udmattelse til resten af ​​pladen. Flydende prøver kan sås på overfladen med en drigalski spatel.

Pladerne inkuberes i aerobiosis ved 37 ° C i 24 timers inkubation.

begrænsninger

-En lille procentdel af stammer af  Pseudomonas aeruginosa Fremstil ikke pyocyanin, så du kan fortolke et falsk negativt.

-Nogle arter af Pseudomonas af klinisk betydning er hæmmet i dette medium.

-Trods overholdelse af de karakteristika, der er beskrevet for Pseudomonas aeruginosa, De skal bekræftes med yderligere identifikationsprøver. En test, som ikke bør mangle, er oxidasetesten, den skal være positiv.

-Nogle enterobakterier kan vokse i dette medium og udvikle et gul pigment, men det adskiller sig fra Pseudomonas aeruginosa i hvilken når pladen udsættes for ultraviolet lys, er der ingen fluorescens.

-Serratia marcescens klarer at udvikle og producere et lyserødt pigment.

-Hvis plaques, der er podet med cetrimidagar, udsættes for en tid ved stuetemperatur, vil stammerne af P. aeruginosa de kan miste fluorescensen observeret under ultraviolet lys, men ejendommen genvindes, hvis den inkuberes igen ved 37 ° C.

Kvalitetskontrol

For at teste korrekt cetrimidagarens funktion kan kontrolstammer anvendes, såsom: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

De forventede resultater er:

  • til P. aeruginosa god vækst med blågrøn pigment og positiv fluorescein.
  • S. maltophilia og S. aureus vil blive delvis eller fuldstændigt hæmmet.
  • Det forventes at Escherichia coli være fuldstændigt hæmmet.

referencer

  1. Callicó A, B Cèdre, Sifontes S, Torres V, Pino og Callis A, Esnard S. Fænotypisk karakterisering og serologiske kliniske isolater af Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratorier Conda Pronadisa. Cetrimid-agarbase. 2014. Tilgængelig på: condalab.com
  3. Laboratorier Britania. Cetrimida agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  4. BD Laboratories BD Pseudosel agar (Cetrimid agar). 2013. Tilgængelig på: bd.com
  5. Francisco Soria Melguizo Laboratory, C.A. Cetrimidagar. 2009. Tilgængelig på: http://f-soria.es