Agar chokolade fundament, brug og forberedelse



den chokolade agar det er et fast, beriget, ikke-selektivt og ikke-differentieret kulturmedium. Det bruges primært til isolering af mikroorganismer, der kræver næringsmæssigt synspunkt, selvom det kan vokse enhver form for bakterier.

Derfor øger dets anvendelighed især i sædningen af ​​prøver, som normalt er sterile, såsom CSF og fugevæske. Selv om det også er inkluderet inden for de midler, der er valgt til såning af polymikrobielle prøver, men i disse tilfælde er det nødvendigt at tilføje antibiotika, der hæmmer den samtidig flora.

Dette medium har en karakteristisk brun farve, der ligner meget på chokolade og dermed dets navn. Præparatet ligner meget agar på blodet, kun i dette tilfælde skal blodet opvarmes for at røde blodlegemer kan gå i stykker.

Dens forberedelse, som blod agar, er meget delikat, da det er let forurenet. Af denne grund foretrækker mange laboratorier at erhverve dette medium, der allerede er udarbejdet af kommercielle huse, der garanterer deres kvalitet.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 anvendelser
    • 2.1 Chokoladeagar fremstillet med Columbia agar
    • 2.2 Chokolade agar fremstillet med GC base agar (til gonokokker)
    • 2.3 Chokoladeagar fremstillet med Müeller Hinton agar
    • 2.4 Chokolade agar fremstillet med Thayer Martin agar
  • 3 Fremstilling
    • 3.1 Beregninger
    • 3.2 vejning og opløsning
    • 3,3 sterilisere
    • 3.4 Aggregering af blod
    • 3,5 En anden måde at tilberede chokolade agar uden at bruge blod
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 referencer

fundament

Dette medium består af en base af agar, der er rig på næringsstoffer og opvarmet blod. Hemolysen af ​​røde blodlegemer giver faktor X (hemin) og faktor V (NAD), som er nødvendige for væksten af ​​nogle mikroorganismer, såsom slægten. Haemophilus. Det er også meget nyttigt til isolering af Neisserias sp.

Som blod agar kan forskellige medier anvendes som base agar afhængigt af behovet. Blandt de anvendte medier er hjernehjerteinfusion og tryptikase soja agar, selvom de mest anbefalede er Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar og Thayer Martin agar..

Nogle varianter af chokoladeagar omfatter et kommercielt tilgængeligt beriget supplement, der hedder Isovitalex eller Polivitex.

Disse kosttilskud indeholder vitamin B12, L-glutamin, adenin, guanin-hydrochlorid, p-aminobenzoesyre, nicotinamidadenindinucleotid (NAD), thiaminpyrophosphat, ferrinitrat, thiamin-hydrochlorid, cysteinhydrochlorid, L-cystin og glucose.

Det er vigtigt at bemærke, at chokoladeagar er beriget mere end blodagar, men tillader ikke observation af hæmolysemønstre.

applikationer

Chokolade agar fremstillet med Columbia agar

Dette medium indeholder kasepeptid, kasein og hjerte-bugspytkirtel, fordøjet kødpeptid, natriumchlorid, agar, gærekstrakt og majsstivelse. Det er også rig på vitaminer, mineraler og essentielle aminosyrer.

Denne base med opvarmet blod er ideel til isolering af bakterier af slægten Neisseria. På den anden side, hvis et tillæg til Brucella tilsættes til mediet, kan den førnævnte mikroorganisme isoleres. Resultaterne forbedres ved hjælp af hesteblod.

Chokolade agar fremstillet med GC base agar (til gonokokker)

Dette medium indeholder peptoner, majsstivelse, monobasiske og dibasiske buffere, natriumchlorid og agar.

Fleste chokoladeagarplader præsentationer kommercielt fremstillet med denne base og indeholder opvarmet blod, men en syntetisk blanding af hæmin og et kemisk supplement af vækstfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyrer, glucose og faktor V.

Chokolade agar fremstillet med Müeller Hinton agar

Det bruges til at udføre den antimikrobielle modtagelsestest af krævende mikroorganismer, såsom Streptococcus pneumoniae ved hjælp af 5% opvarmet ramblod.

Det tjener også til primær isolering af Neisserias og Haemophilus, men i det særlige tilfælde af isolering af Haemophilus brugen af ​​hesteblod foretrækkes, da det er en rig kilde til faktor X og V.

På den anden side, hvis prøven, der skal sås, kommer fra et ikke-sterilt område, anbefales tilsætning af antibiotika til at hæmme den normale flora af området..

Eksempel på respiratoriske prøver, hvor tilstedeværelsen af ​​bakterier i slægten er mistænkt Haemophilus Bacitracin bruges til at hæmme væksten af Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus og Saprophytic Neisseria.

I tilfælde af prøver af kønsorganer, hvor det er mistænkt Haemophilus ducreyi, er blevet anvendt med succes chokoladeagar fremstillet som følger: Mueller - Hinton-agar med 5% hesteblod chocolatizada, 1% Isovitalex berigelse og 3 ug / ml vancomycin.

Chokoladeagar forberedt med Thayer Martin agar

Dette medium er specielt til isolering af Neisseria gonorrhoeae. Den skal indeholde antibiotika for at hæmme den ledsagende flora. Lamblod anvendes.

forberedelse

Indikationerne for fremstilling af basisagar, der skal anvendes, skal ses. De er på bagsiden af ​​pakken af ​​dehydreret medium. De beskriver normalt, hvor meget der skal vejes for at forberede en liter kulturmedium.

I laboratoriet kan du forberede det nøjagtige nødvendige beløb, det kan være mere end en liter.

beregninger

En regel på tre er lavet til at beregne, hvor meget der skal vejes for at forberede det ønskede volumen. eksempel:

Hvis det for 1 liter er nødvendigt at veje 40 gr og laboratoriet kræver 800 ml, siges det:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formlen vil være som følger:

X = 32 gr (mængde til vejning i 800 ml).

Vejes og opløses

Vi fortsætter med at veje det nødvendige beløb og placere det i en bølle med vand.

Varm til moderat varme og bland forsigtigt med rotationsbevægelser, indtil det dehydrerede medium er fuldstændigt opløst, lad det koge i 1 minut.

sterilisere

Fiolaen indføres i autoklaven for at sterilisere mediet ved 121 ° C i 20 minutter.

Aggregeret af blod

Når man forlader autoklaven, står den til hvile, indtil medietemperaturen er ca. 56 til 70 ° C for at placere blodet og blande, indtil mediet bliver brun.

Hvis du vil tilføje kosttilskud, er det tid til at gøre det. Bland derefter og server 20 ml til hver steril petriskål.

Hele proceduren skal udføres i en laminær strømningshætte eller omkring Bunsen-brænderen.

Lad stå, indtil de størkner og holder omvendt i køleskab.

En anden måde at tilberede chokolade agar uden at bruge blod

Basismediet fremstilles som beskrevet ovenfor, det kommercielt opnåede dehydrerede hæmoglobin opløses og steriliseres i autoklaven.

Begge opløsninger får lov til at afkøle til 50 ° C, tilslutte og tilsætte tilskuddet. Bland i aseptiske forhold og server derefter i sterile petriskåle.

Kvalitetskontrol

Det er vigtigt, at blodet placeres ved den angivne temperatur, fordi den er ideel til lysning af de røde blodlegemer og samtidig opretholdelse af faktor V, der er termosensitiv.

Der bør ikke være bobler på overfladen af ​​agar. Hver sats på 100 plader skal inkuberes en eller to plader i ovnen ved 37 ° C i 24 timer for at kontrollere dets sterilitet.

For de bedste resultater bør chokoladeagar anvendes kort efter tilberedning.

Kontrol bakteriestammer bør tages i laboratoriet for at evaluere effektiviteten af ​​det frisklavede medium til væksten af ​​de vigtigste krævende mikroorganismer af klinisk betydning.

referencer

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Mulighed for anvendelsen af ​​basiskulturmediet af GC-Biocen Agar i Microbiology Laboratory. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Tilgængelig på: scielo.sld.
  5. Wikipedia bidragsydere. Chokolade agar. Wikipedia, den frie encyklopædi. 17. december 2018, 19:54 UTC. Tilgængelig på: en.wikipedia.org.