Simmons citrat agarfundament, fremstilling og anvendelse



den Simmons Citrate agar Det er et fast medium anvendt som negative biokemiske identifikation forsøgsmikroorganismer, især Gram. Det oprindelige medium blev oprettet af Koser i 1923.

Kosers citratmedium bestod af en bouillon indeholdende natriumphosphat, ammoniumphosphat, monokaliumphosphat, magnesiumsulfat og natriumcitrat..

Som det kan ses er den eneste carbonkilde i mediet citrat, og nitrogen er ammoniumphosphat, proteiner og kulhydrater udelades som en kilde til disse elementer, de er almindeligvis til stede i andre medier..

Derfor kan bakterien podet i dette medium kun reproducere, hvis den er i stand til at tage citratkulinet. Prøven var positiv, hvis der var uklarhed i mediet, men det havde den ulempe, at ikke-specifik turbiditet kunne forekomme.

Dette problem blev løst af Simmons tilsætning af agar og bromothymolblåt til Kosers oprindelige formel. Selvom princippet er det samme, fortolkes det anderledes.

indeks

  • 1 Foundation
    • 1.1 Frøtilstand
    • 1.2 Fortolkning
  • 2 Fremstilling
  • 3 Brug
  • 4 Endelige overvejelser
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 Frø
    • 4.3 Farveintensitet
  • 5 referencer

fundament

Nogle bakterier har evnen til at overleve i fravær af gæring eller produktion af mælkesyre, der behøver at få energi ved brug af andre substrater. I denne test er den eneste kilde til kulstof der tilbydes citrat.

Bakterier, der er i stand til at overleve under disse betingelser, metaboliserer citrat hurtigt gennem et alternativ til den traditionelle rute ved anvendelse af tricarboxylsyrecyklusen eller citratfermenteringscyklussen.

Katraten af ​​citrat med bakterier omfatter en enzymatisk mekanisme uden indblanding af coenzym A. Dette enzym er kendt som citricase (citratoxaloacetat-lyase) eller citrat desmolase. Reaktionen kræver tilstedeværelsen af ​​en bivalent kation, som i dette tilfælde leveres af magnesiumet.

Reaktionen frembringer oxaloacetat og pyruvat, som derefter giver anledning til organiske syrer i midten af ​​en alkalisk pH dannet ved anvendelse af nitrogenkilden. Disse organiske syrer anvendes som en carbonkilde, der frembringer carbonater og bicarbonater, der yderligere alkaliserer mediet.

Såningstilstand

Simmons citratmedium bør let podes ind i fiskestalen ved hjælp af lige sløjfe eller nål og inkuberes i 24 timer ved 35-37 ° C. I slutningen af ​​tiden observeres resultaterne.

Sædning udføres kun på overfladen af ​​agar. Gør ikke punktering.

fortolkning

Hvis mediet er af den oprindelige farve (grøn) og der ikke er nogen synlig vækst, er testen negativ, men hvis mediet ændres til blåt, indikerer det forekomsten af ​​alkaliske produkter, som detekteres af pH-indikatoren. I dette tilfælde er testen positiv.

Dette sker, fordi hvis bakterien bruger citratkulinet, er det også i stand til at tage nitrogenet af ammoniumphosphatet, med hvilket det frigiver ammoniak, der alkaliserer mediet.

På den anden side, hvis væksten af ​​bakterierne observeres i mediet, men der ikke er nogen farveforandring, skal testen også betragtes som positiv, da hvis der er vækst betyder det, at bakterierne kunne bruge citrat som carbonkilde, selvom der ikke er en pH-ændring i øjeblikket (nogle gange kan det tage).

Hvis der er tvivl om fortolkningen af ​​den endelige farve, kan den sammenlignes med et rør af uindtaget citrat.

forberedelse

Vægt 24,2 g af det dehydrerede medium for en liter vand. Bland og lad stå i 5 minutter ca. Afslut opløsningen af ​​mediet ved opvarmning i 1 eller 2 minutter, omrøring ofte.

Server 4 ml i reagensglas og autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. Når du forlader autoklaven, vippes ved hjælp af en støtte på en sådan måde, at agar størkner i form af en fløjtestop med lille klap eller bund og mere skrånende.

Den endelige pH af citratmediet er 6,9 (grøn). Dette medium er meget følsomt for pH-ændring.

Ved pH 6 eller derunder bliver mediet gult. Denne farve overholdes ikke i testen med bakterier.

Og ved pH 7,6 eller derover ændres mediet til intens preussisk blå.

brug

Simmons citratagar anvendes til identifikation af visse mikroorganismer, især baciller tilhørende familien Enterobacteriaceae og andre glukose-ikke-fermenterende baciller..

Endelige overvejelser

Simmons citratmedium er en meget delikat test, fordi falske positiver kan opnås, hvis visse fejl opstår.

Den pleje, der skal tages, er følgende:

inokulum

Lav ikke et meget tykt eller ladet bakteriel inokulum, fordi det kan forårsage en coppery gul farve til at udvikle sig på plantepladsen uden at påvirke resten af ​​mediet, men det kan føre til troen på, at der er vækst. Det samme betyder ikke, at testen er positiv.

Ligeledes kan et tykt inokulum generere en falsk positiv, fordi præformede organiske forbindelser inden i cellevægge af døende bakterier kan frigøre tilstrækkelig kulstof og nitrogen til at dreje pH-indikatoren.

Derfor er idealet at plante ved hjælp af nålen i stedet for platinhåndtaget for at undgå at overtage overskydende materiale.

plantet

På den anden side er det vigtigt, at når citratkatalysatorbatteriet bliver plantet til identifikation af den pågældende mikroorganisme, er citrattesten den første, der skal podes, for at undgå at trække proteiner eller kulhydrater fra et andet medium.

Under denne omstændighed er det muligt at opnå en falsk positiv, fordi ethvert af disse stoffer, der indføres ved en fejl, vil blive metaboliseret og forårsage en ændring i pH.

En anden måde at undgå dragen af ​​stoffer er at brænde håndtaget godt og tage nyt inokulum mellem en test og en anden.

Pas på også, når du berører kolonien for at udføre inokulumet, da det bør undgås at trække en del af agar fra den kultur, som bakterierne kommer fra, på grund af de tidligere forklarede.

I denne forstand anbefaler Matsen, Sherris og Branson, at fortynde inokulumet i fysiologisk opløsning, før man inokulerer citrattesten for at undgå overførsel af andre carbonkilder.

Farveintensitet

Det skal tages i betragtning, at intensiteten af ​​den farve, der produceres, når testen er positiv, kan variere afhængigt af det kommercielle hus.

Derudover er der mikroorganismer, der tester positivt efter 24 timer, men der er andre stammer, som kræver 48 timer eller mere for at frembringe en ændring i pH.

referencer

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske test til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Tilgængelig på: bd.com
  5. Laboratorier Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2016. Tilgængelig på: andinamedica.com.