Agar CLED fundament, brug og forberedelse



den CLED agar (Cystin-Lactose-Electrolytes-Deficient) er et differentielt fast dyrkningsmedium, der anvendes til diagnose af urinvejsinfektioner. Sammensætningen af ​​dyrkningsmediet er designet til den gode vækst af urinpatogener og er ideel til kvantificering af kolonidannende enheder (CFU).

CLED-kulturmediet er ikke-selektivt, da gramnegative og også gram-positive mikroorganismer kan vokse i den. Men dette er ikke et problem, da de fleste urinvejsinfektioner er forårsaget af en enkelt type mikroorganismer.

I tilfælde af polymikrobielle infektioner kan 2 eller 3 forskellige bakterier opnås, men det er meget sjældent, og det meste er det forurenede prøver.

Blandt de gramnegative bakterier der kan vokse i dette medium er bacillerne tilhørende familien Enterobacteriaceae og andre enteriske baciller, hvor uropathogenerne oftest isoleres i urinprøver, følgende: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, blandt andre.

Ligeledes er blandt de gram-positive bakterier, der kan vokse i dette medium Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp og de kan endda dyrke gær, som komplekset Candida albicans.

På grund af den kemiske sammensætning af mediet tillader det dog ikke væksten af ​​nogle krævende genitourinske patogener, såsom Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, blandt andre.

indeks

  • 1 Foundation for CLED agar
  • 2 Foundation for CLED agar (Bevis)
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Såning af urinprøver
    • 3.2 Fortolkning
    • 3.3 Identifikation
  • 4 Fremstilling
  • 5 referencer

Foundation for CLED agar

CLED-kulturmediet har som energikilde kødekstrakt, kasein pankreatisk hydrolysat og gelatinehydrolysat. De giver næringsstoffer til udvikling af ubehagelige bakterier.

Det indeholder også cystin, en aminosyre, der tillader vækst af coliformer, der kan skelnes af dens lille størrelse.

Laktose indeholder ligeledes fermenterbart kulhydrat, derfor er dette medium forskelligt; at kunne skelne de fermenterende bakterier fra den ikke-fermenterende lactose.

Gærende bakterier vende gøre pH i syre produktion for at udvikle gule kolonier, mens ikke-gærende bakterier ikke generere ændringer i miljøet, og dermed tage farven på den oprindelige agar, grøn.

Gæringsreaktionen afsløres takket være tilstedeværelsen af ​​pH-indikatoren, som i dette medium er bromothymolblåt.

På den anden side hæmmer den lave elektrolytkoncentration af mediet den typiske invasive vækst af slægten Proteus, kaldet swarming effekt. Dette giver en fordel med hensyn til andre midler, da det tillader tælling af UFC'erne, herunder om Proteus-slægten er til stede.

Den lave koncentration af elektrolytter hæmmer imidlertid væksten af ​​nogle arter af slægten Shigella, at være dette en ulempe med hensyn til andre midler.

Basis for CLED agar (Bevis)

Der er en variant eller modifikation af dette medium fremstillet af Bevis, som inkorporerede den oprindelige fuchsinsyresammensætning (Andrade-indikator) i den oprindelige sammensætning. Det virker sammen med bromothymolblåt for at differentiere fermentering fra ikke-fermenterende bakterier.

Forskellen mellem det konventionelle og det modificerede medium er farven vedtaget af kolonierne. I tilfælde af de lactose fermenterende bakterier erhverver kolonierne en rødlig oransfarve med en lyserød eller rød halo, mens de ikke-fermenterende er blågrøn..

applikationer

CLED agar anvendes udelukkende til såning af urinprøver. Anvendelsen af ​​dette medium er specielt hyppigt i europæiske laboratorier, mens det i Amerika er mindre anvendt.

Samlingen af ​​prøven skal opfylde visse parametre for at opnå pålidelige resultater, herunder:

  • Ikke at tage antibiotika før prøven tages.
  • Tag helst urinen fra den første time om morgenen, da den er mere koncentreret, når det ikke er muligt at tage prøver ved hjælp af invasive metoder.
  • Vask kønsorganerne grundigt, inden prøven tages.
  • Kassér den første vandladningsstrøm og læg derefter beholderen.
  • Saml mellem 25 og 30 ml urinen i sterile mærkede beholdere.
  • Tag straks til laboratoriet omgivet af is.
  • Den skal behandles inden 2 timers udledning eller køles ved 4 ° C i højst 24 timer.

Såning urinprøver

Urinprøven skal fortyndes 1:50.

Til fortynding placeres 0,5 ml patientens urin og fortyndes med 24,5 ml steril fysiologisk opløsning.

Mål 0,1 ml af den fortyndede urin og sug pr. Overflade med en drigalski-spatel på CLED-mediet. Dette er seedmetoden angivet til tælling af kolonier. Det er derfor, det bruges i urinprøver, da resultaterne skal udtrykkes i CFU / ml.

For kvantificering af de opnåede kolonier, fortsæt som følger: Tæl kolonierne af pladen og formindsk med 10 og derefter med 50. På denne måde får du mængden af ​​CFU / ml urin.

fortolkning

Tæller over 100.000 CFU / ml-Indica urininfektion

Tæller under 1000 CFU / ml-ingen infektion

Tæller mellem 1000-10.000 CFU / ml -Dubtful, mulig forurening, gentagelse af prøveudtagning.

identifikation

Kolonierne, der dyrkes på CLED-agar, bør fremstilles et gram og afhængig af mikroorganismens morphotypeintensive egenskaber udføres en vis subkultur.

For eksempel, hvis det er en Gram-negativ bacillus, vil den blive sådet på en MacConkey-agar, hvor gæringen eller ej af lactosen er bekræftet. Derudover er en næringsrig agar bundet til at udføre oxidasetesten.

Hvis Gram afslører Gram-positive kokoser, kan den subkultiveres i salt mannitolagar og i næringsmiddelagar. I sidstnævnte udføres katalastesten. Endelig, hvis gær er observeret, vil det blive sådet på en Sabouraud agar.

Mange laboratorier undgår brugen af ​​CLED-mediet og foretrækker kun at anvende blodagar, MacConkey og næringsmiddel agar til at så urinprøverne.

forberedelse

I et hætteglas med 1 liter destilleret vand opløses 36,2 g pulveriseret CLED-agar. Efter 5 minutters hvile opvarmes den resuspenderede agar, blandes konstant, indtil den koges i 1 minut.

Steriliser derefter ved 121 ° C i 15 minutter i autoklaven. Når tiden er afsluttet, fjernes den fra autoklaven og får lov til afkøling, indtil den når en temperatur på 45 ° C. Derefter tjente mellem 15 - 20 ml i hver steril petriskål.

Fremgangsmåden til betjening af pladerne skal udføres inde i en laminær strømningshætte eller foran Bunsen-brænderen for at undgå forurening.

Pladerne får lov at størkne total, er anbragt i en portaplaquero inverteret og opbevares i køleskab (2-8 ° C) indtil anvendelse.

Den færdige pH-værdi af det fremstillede medium bør være 7,3 ± 0,2.

referencer

  1. Anbefalinger til mikrobiologisk diagnose af urinvejsinfektion. chil. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Tilgængelig på: scielo.org.
  2. Panchi J. Identifikation af det mikrobielle middel, der forårsager urininfektioner hos interne patienter, der gennemgår blærekateterisering. 2016. Undergraduate arbejde til at ansøge om titel af Licentiate i Clinical Laboratory. Technical University of Ambato. Ecuador.
  3. Laboratorier Britania. Half CLED. Tilgængelig på: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Instruktioner til brug, CLED Agar. 2013 Tilgængelig på: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Grundlæggende manual om mikrobiologi. Tilgængelig på: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodriguez-Creixems M, Diaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED agar mulighed i urin kultur rutine. En prospektiv og sammenlignende evaluering. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.