Pepton vand fundament, forberedelse og anvendelser

den peptonada vand det er et ikke-selektivt flydende berigelsesmedium, der hovedsagelig anvendes som fortyndingsmiddel til fødeprøver eller andre materialer. Dette betyder, at det kemiske synspunkt er meget simpelt, indeholder pepton af kød, natriumchlorid og vand.

Det har en bestemt ernæringsværdi, der giver mulighed for at berige prøven. Hvis der er slagtede bakterier, betyder det, at det er muligt at reparere levedygtigheden. Det er især nyttigt i genopretning af bakterier, der tilhører familien Enterobacteriaceae.

I tilfælde af genopretning af salmonellas anbefales brugen af ​​den pufrede peptonada vandvariant; Dette tjener som et middel til præ-berigelse af prøven, i dette tilfælde indeholder den andre elementer såsom dinatriumphosphat og dipaliumphosphat.

Normalt fremstilles peptonada-vand i neutral pH, men der er andre varianter, hvor det er nødvendigt, at pH er 8,5 ± 0,2 (alkalisk), fordi de bakterier, der skal isoleres, er alkalofile, som for eksempel Vibrio cholerae.

På den anden side kan dette medium anvendes som et basismedium til kulhydratgæringstest.

indeks

• 1 Foundation
• 2 Fremstilling
  • 2.1 Hjem forberedelse (ikke-kommerciel)
  • 2.2 Fremstilling under anvendelse af kommercielt medium
  • 2.3 Forberedelse til gæringstest
  • 2.4 Andre varianter af peptonada vand
• 3 Brug
  • 3.1 Taburetter
  • 3.2 Madprøver
• 4 Kvalitetskontrol
• 5 begrænsninger
• 6 referencer

fundament

Peptoner giver de nødvendige næringsstoffer til bakteriel udvikling, især nitrogen- og kortkædede aminosyrer, mens natriumchlorid opretholder osmotisk balance.

Derudover tillader mediet at dispergere, homogenisere og reparere bakterieceller, der er blevet beskadiget af industrielle processer..

Som et fortyndingsmiddel er det ideelt, effektivt at erstatte den fysiologiske opløsning (SSF) eller phosphatpufferen (PBS).

Bakteriel vækst er tydelig ved at observere grumlen af ​​den.

forberedelse

Hjemmelavet forberedelse (ikke-kommercielt)

Afvej 1 g pepton og 8,5 g natriumchlorid, opløs i 1 liter destilleret vand. PH bør justeres til 7,0. Til dette kan du bruge 1 N natriumchlorid.

Fremstilling under anvendelse af kommercielt medium

Væg 15 g af det dehydrerede medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Homogeniser blandingen. Om nødvendigt koges blandingen i 1 minut for at hjælpe total opløsning. Serveres i 100 ml hætteglas eller i 10 ml rør efter behov. Autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter.

Cool og brug eller opbevar i køleskab. Den endelige pH i mediet er 7,2 ± 0,2.

Farven på det dehydrerede medium er let beige og fremstilles er lysegult.

Forberedelse til gæringstest

Til det forrige præparat - inden sterilisering - skal kulhydratet tilsættes til en slutkoncentration på 1% plus Andrade-indikatoren (syrefuchsin) eller fenolrød (0,018 g / l). En Durham-klokke til observation af gasdannelse skal placeres på rørene.

Andre peptonada vandvarianter

-Peptonvand pufret eller bufret

Den indeholder kasein enzymatisk hydrolysat, natriumchlorid, kaliumdihydrogenphosphat og natriumhydrogenphosphatdodecahydrat. Den endelige pH er 7,0 ± 0,2.

Til fremstillingen vejes 20 g af det dehydratiserede medium og opløses i 1 liter destilleret vand. Lad stå i 5 minutter ca. Varm i 1 minut, indtil det er helt opløst.

Hæld i passende flasker efter behov. Steriliser ved anvendelse af autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

-Alkalisk peptoned vand

Vejes 25 g af det dehydrerede medium og opløses i 1 liter vand. Fortsæt som beskrevet ovenfor. PH varierer fra 8,3 til 8,7.

brug

Inokulumet udføres ved at placere prøven direkte.

Det bruges til at fortynde prøverne, især når man mistanke om, at der kan være skadede bakterier. Sædvanligvis er fortyndingerne 1:10 og 1: 100.

Inkuber i 24 timer i aerobios ved 35-37 ° C.

Afføring prøver

For afføringsproblemer, der søger Salmonella, anbefales brug af pufret eller pufret vand som et præ-berigelsesmedium..

For at gøre dette skal du gøre følgende:

Hvis afføringen er dannet, tag 1 g prøve. Hvis de er flydende, tag 1 ml afføring og suspender i et rør med 10 ml pufret peptoniseret vand. I tilfælde af rektal swabs, udledning det materiale, der er indeholdt i vatpinden i røret med pufret peptoneret vand.

I alle tilfælde blandes og homogeniseres prøven meget godt.

Inkuber ved 37 ° C i 18 til 24 timer. Derefter sub-dyrkes i en berigelsesbuljong, såsom selenitcystinbuljong eller tetrathionat bouillon ved 37 ° C i 18-24 timer. Til sidst dyrkes i selektive medier til Salmonella, såsom SS agar, XLD agar, Hektoen agar, blandt andre.

Madprøver

Peptonvand anvendes som et berigelsesmedium eller som et simpelt fortyndingsmiddel, men hvis der søges Salmonella-arter, anvendes det som et præ-berigelsesmedium som allerede beskrevet..

I fødevarer fortsæt som følger:

For faste fødevarer vejer 25 g af prøven og måler 25 ml af flydende fødevarer. Anbring den nævnte del i kolber indeholdende 225 ml peptoniseret vand. Bland og homogeniser prøven.

Hvis det antages, at den mikrobielle belastning er høj serielle fortyndinger eller decimaler kan gøres for at lette tællingen af ​​kolonidannende enheder (CFU).

Antallet af fortyndinger afhænger af typen af ​​prøve og den analytiske oplevelse.

Hvis man tværtimod antager, at den mikrobielle belastning er meget lav, er det ikke nødvendigt at lave fortyndinger. Derefter subcultiveres i selektive medier.

I tilfælde af mad fra havet, såsom fisk og skaldyr, fisk, blandt andet på jagt efter Vibrio cholerae eller andre Vibrio-arter, bør peptonvand justeret til pH 8,5 (alkalisk peptoniseret vand) anvendes.

Kvalitetskontrol

Fra hver batch, der fremstilles, bør en til to rør inkuberes uden podning i 24 timer i aerobios ved 37 ° C. Ved slutningen af ​​tiden bør der ikke observeres uklarhed eller farveændringer.

Også velkendte kontrolstammer kan bruges til at evaluere deres effektivitet:

Til dette kan følgende bakteriestammer anvendes: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

I alle tilfælde forventes en tilfredsstillende mikrobiel udvikling, som observeres ved mediumets turbiditet.

begrænsninger

-Det dehydrerede medium er meget hygroskopisk, så det skal holdes væk fra fugt.

-Mediet bør ikke anvendes, hvis der opdages en form for forringelse.

-Det dehydrerede dyrkningsmedium bør opbevares mellem 10 og 35 ° C

-Det fremstillede medium bør opbevares kølet (2-8 ° C).

referencer

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. Teknikker til mikrobiologisk analyse af fødevarer. 2009, 2. udgave. Fakultet for Kemi, UNAM. Mexico. Version for Administrator af Manualer og Dokumenter (AMyD) fra Det Kemiske Fakultet, UNAM 1. Tilgængelig på: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratorier Britania. Buffered peptonada vand. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Pepton vand. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
4. Laboratorier Britania. Pepton vand. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
5. Merck Laboratories Bufferet peptonvand. Tilgængelig på: merckmillipore.com
6. Laboratorier Conda Pronadisa. Alkalisk peptoned vand. Tilgængelig på: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.