EF bouillon fundament, forberedelse og anvendelser



den EF bouillon eller bouillon Escherichia coli Det er et selektivt flydende kulturmedium. Dette medium anbefales af standardmetoderne til optælling af totale og fækale coliformer ved teknikken med det mest sandsynlige tal (NMP) i vand- og fødeprøver, hvor hovedagenten er involveret Escherichia coli.

EF-bouillon består af triptin, lactose, galdesalte, dikaliumphosphat, monokaliumphosphat, natriumchlorid og vand. Dens formel er strategisk designet til at favorisere væksten af ​​totale og fækale coliformer og forhindre udvikling af andre ledsagende mikroorganismer.

Bakterien Escherichia coli er den vigtigste fækale coliform til stede som en forurening i vand og fødekilder, der forårsager vigtige gastrointestinale påvirkning.

Det skal bemærkes, at der er mange serotyper af Escherchia coli; blandt dem kan vi nævne den enterohemorragiske (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropathogene (EPEC), enterotoxigeniske (ETEC) og enteroaggregative (EAEC).

Dette betyder at have mulighed for at tillade udviklingen af ​​dem alle, men uden at kunne skelne mellem dem. For at gøre dette skal der udføres yderligere test.

Den mikrobiologiske undersøgelse af vand og mad ved det mest sandsynlige antal (NMP) til søgning af total og fækale coliformer er en protokol, som er i overensstemmelse med flere faser; formodningsfase, bekræftelsesfase og færdiggørelsesfase. EF-bouillon anvendes i den bekræftende fase.

indeks

  • 1 Foundation
    • 1,1 EF-bouillon
    • 1,2 EF-bouillon modificeret med novobiocin
  • 2 Fremstilling
    • 2,1 EF bouillon
    • 2,2 EC bouillon modificeret med novobiocin
  • 3 Brug
    • 3.1 Analyse af totale og fækale coliformer
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 anbefalinger
  • 6 referencer

fundament

EF-bouillon

EF-mediet er baseret på at tilvejebringe de nødvendige næringselementer til den optimale udvikling af totale og fækale coliformer, hvor bakterien er inkluderet Escherichia coli.

Disse ernæringsmæssige elementer tilvejebringes af triptein, idet de er en fremragende kilde til peptider og aminosyrer. Derudover indeholder den også lactose, et fermentabelt kulhydrat, som giver energi og giver mulighed for at vise, om bakterierne producerer gas.

På den anden side indeholder mediet galdesalte, der tilvejebringer det selektive karakter, da det hæmmer væksten af ​​gram-positive mikroorganismer, der kan være til stede i prøven..

Ligeledes virker dipaliumphosphat og monokaliumphosphat som et pH-balanceringssystem. Dette system er nødvendigt, fordi lactosen indeholdt i bouillon tenderer til at syrne mediet, når det fermenteres af mikroorganismer, men dette kompenseres af phosphatsalte.

Derfor er disse elementer essentielle, fordi den ukontrollerede surhed kan påvirke den korrekte udvikling af de ønskede mikroorganismer.

For sin del stabiliserer natriumchlorid mediet osmotisk, medens vand er opløsningsmidlet af de opløste stoffer, der er til stede, og tilvejebringer den flydende konsistens til mediet.

EF-bouillon modificeret med novobiocin

Okrend og Rose skabte en række EF-bouillon, kaldet EF-bouillon modificeret med novobiocin. Modifikationen bestod i reduktionen af ​​koncentrationen af ​​galdesalte og tilsætningen af ​​20 mg / dl novobiocin.

Denne modifikation favoriserer genoprettelsen af ​​stammer af Escherichia coli enterohemorragisk (O157: H7).

Denne bakterielle serotype forårsager alvorlig hæmoragisk colitis, der kan forårsage hæmolytisk uremisk syndrom (HUS); som igen kan generere akut nyresvigt med en høj dødelighed, der kan nå op til 50% hos ældre.

På grund af sygdommen og dødeligheden forårsaget årligt af denne bakterie på grund af forbruget af forurenet mad, anbefaler USA's Department of Agriculture (USDA) i vid udstrækning brugen af ​​dette middel.

forberedelse

EF-bouillon

Vejer 37,4 g af det dehydrerede medium og opløses i 1 liter destilleret vand. Blandingen skal henstå til hvile i 5 minutter. Derefter opløses opløsningen ofte i en varmekilde.

Når den er opløst, fordeles den i reagensglas, der tidligere er konditioneret med et Durham-rør inde. Steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Mediumets pH bør være 6,9 ​​± 0,2. Farven på det dehydrerede medium er beige og fremstilles er lysegult.

Vinene opbevares i køleskab, indtil de anvendes. Ved brugstid skal bouillonerne være ved stuetemperatur.

På den anden side kan EF-bouillon også fremstilles ved dobbelt koncentration.

EF-bouillon modificeret med novobiocin

Vægt 36,7 g af det dehydreret medium og opløs i 1 liter vand. Resten af ​​præparatet er det samme som det ovenfor beskrevne.

brug

Analyse af totale og fækale coliformer

EF-bouillon er ideel til den bekræftende fase af undersøgelsen af ​​coliforms ved NMP-metoden, både i vandprøver, som i farmaceutiske produkter og fødevarer.

Lazy turbid og gasproduktion bouillon opnået i presumptive fase bør resesed i 2% lysegrøn galde og EF bouillon.

Til samlede coliformer inkuberes EF-bouillerne i aerobiosi i 24 til 48 timer ved 37 ° C, og for fækale coliformer inkuberes de i aerobiosi i 24 til 48 timer ved 44 ° C.

I begge tilfælde fortolkes det på følgende måde: De uklare rør med gasproduktion anses for positive. Hvis der ikke er nogen gasproduktion i 24 timer, fortsættes inkubation i op til 48 timer.

EF-positive buljonger passerer til den fuldstændige bekræftende fase, som består af resning i selektive medier, såsom Mac Conkey agar, EMB agar eller Endo agar..

Hvis den anvendte bouillon er EC modificeret med novobiocin, anbefales de positive rør at vende på Mac Conkey agar med sorbitol.

Kvalitetskontrol

Kvalitetskontrol skal udføres på hvert parti af tilberedt medium. For det første skal steriliteten af ​​mediet evalueres. I denne forstand inkuberes en eller to bouillon uden at inokulere i aerobiose i 24 timer ved 37 ° C. Det forventede resultat er en gennemsigtig bouillon uden turbiditet eller farveændring.

For det andet skal væksten af ​​kendte stammer evalueres, for hvilke følgende bakterier kan anvendes: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I alle tilfælde forventes en tilfredsstillende mikrobiel udvikling, idet der observeres en uklar væske med gasproduktion til E. coli og uden gas til salmonella.

Andre stammer, der kan indgå i kontrollen, er: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Disse stammer skal være fuldstændigt hæmmet.

anbefalinger

-Placeringen af ​​Durham rør er afgørende for undersøgelsen af ​​coliforms.

-Fordel mediet i reagensglasene inden sterilisering, aldrig efter.

-Må ikke anvendes, hvis mediet har mere end 3 måneders forberedelse.

-Anvend ikke, hvis der er nogen ændring i medietes sædvanlige egenskaber.

referencer

  1. Laboratorier Britania. EC Medium. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  2. E. coli enterohæmorrhagiske. Center for fødevaresikkerhed og folkesundhed. 2010. Tilgængelig på: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Medium EC. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
  4. Neogen. Medium EC modificeret med novobiocin. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Detektion, isolering og karakterisering af Escherichia coli producent af Shiga-toksin fra friskkød fra slagterbutikker i Concepción, provinsen Tucumán. Rev Microgol af Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Tilgængelig på: www.scielo.org.