Foundation lactosado bouillon, forberedelse og anvendelse

den lactose bouillon er et flydende, ikke-selektivt dyrkningsmedium, der hovedsagelig anvendes som et præ-berigelsesmedium i isolering af salmonella-stammer fra mikrobiologisk analyse udført på forarbejdede fødevarer, mejeriprodukter eller vand. Dette anbefales af International Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMPF).

Mediet indeholder enzymatisk fordøjelse af gelatine, kødekstrakt og lactose, stoffer der er nødvendige for bakteriel vækst. Derudover er lactose en fermenterbar kulhydrat, så nogle coliforms er i stand til at opdele det med gasproduktion.

Derfor er laktose bouillon anbefales af American Public Health Association (APHA) til formodede undersøgelse af totale og fækale coliforme bakterier, kalder det et glimrende alternativ til at erstatte lauryl bouillon sulfat Tryptose standard teknik Most Probable Number (NMP ), der anvendes til mikrobiologisk analyse af prøver af fødevarer, mælk og overfladevand, underjordisk, rekreativt, husholdningsaffald og industriaffald.

indeks

• 1 Foundation
• 2 Fremstilling
• 3 anvendelser
  • 3.1 Pre-berigelse
  • 3.2 Analyse af totale og fækale coliformer
• 4 Kvalitetskontrol af mediet
• 5 referencer

fundament

Til mikrobiologisk analyse af nogle samples over præ-berigelse er det vigtigt at udvinde en specifik mikroorganisme, som kan være i meget små mængder eller under gunstige betingelser, som krænker gennemførligheden eller minimere.

Det er tilfældet med tørre og forarbejdede fødevarer, eventuelt forurenet med Salmonella sp. I disse tilfælde, hvis bakterierne er til stede, har de lidt fysisk og kemisk mishandling under produktionen af ​​produktet..

På en sådan måde, at mikroorganismerne udsættes for uønskede faktorer såsom dehydrering, eksponering for hæmmende eller toksiske produkter og til overlapningen, der frembringes af tilstedeværelsen af ​​andre bakterier i større mængde, blandt andre..

I denne forstand har lactos bouillon en reparerende virkning på mikroorganismens beskadigede strukturer, hvilket får det til at genoprette og reproducere på en sådan måde, at det kan detekteres.

Ligeledes har lactos bouillon evnen til at fortynde de hæmmende stoffer, som kan påvirke dets levedygtighed, hvilket tillader dets udvikling. Derudover er lactos bouillon ernæringsmæssige sammensætning strategisk til fordel for væksten af Salmonella sp over andre mikroorganismer.

Til den endelige identifikation skal den subkultiveres til andre midler til endelige afgrøder.

På den anden side tillader sammensætningen af ​​mediet også detektion af lactosefermenterende mikroorganismer, der producerer gas.

forberedelse

For at forberede en liter lactose bouillon vejer 13 gram det dehydreret medium og opløses i 1000 ml destilleret vand.

For at hjælpe med at opløse mediet i vandet kan du opvarme opløsningen lidt, men ikke for meget..

Når homogen opløsningen fremstillet som følger: hvis bouillonen anvendes til at søge efter coliformer, et rack med prøverør, som indføres i en fermenteringsrør Durham forbereder munden ned.

Durhamrøret er en meget vigtig detalje, fordi det vil tillade at detektere dannelsen af ​​gas, værdifulde data i søgen efter coliformer.

Når rørene er klare, udleveres 10 ml laktosbuljong i dem, som skal være tilstrækkelige til at dække hele Durham-røret..

Hvis laktos bouillon skal bruges som en berigelse bouillon, er det ikke nødvendigt at placere et Durham fermenteringsrør. I dette tilfælde kræves en større mængde medium (225 ml), som serveres i 500 ml flasker, bred mund og med en termohærdig skruelåg.

Efterfølgende føres rørene eller kolberne til autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Mediet bør forblive ved en endelig pH på 6,9 ± 0,2 ved 25 ° C.

Vinene opbevares i køleskab, indtil de anvendes.

Før brug skal buljørene tempereres ved stuetemperatur.

På den anden side kan lactosebæren også fremstilles ved dobbelt koncentration.

Nogle laboratorier tilføjer bromocresolpurpur til lactosebølgen som en pH-indikator for at vise rørene, hvor der har været laktosgæring ved farveændringen. I dette tilfælde tager bouillon en lilla farve, og hvis gæringen bliver gul.

applikationer

I mikrobiologi laboratorier lactosed bouillon er meget udbredt som et relativt billigt medium, der giver pålidelige og hurtige resultater (24-48 timer).

Det kan bruges til analyse af totale og fækale coliformer i vand og mad eller som en berigelse bouillon til Salmonella.

forudgående berigelse

Præ-berigelse er et trin forud for berigelsen af ​​prøven, hvilket i høj grad forbedrer genopretningen af ​​bakterier af slægten Salmonella i forarbejdede fødevarer.

For at gøre dette udsås prøven af ​​den faste fødevare (25 gram) eller væske (25 ml) i 225 ml lactos bouillon og inkuberes i 24 til 48 timer. Efterfølgende vil selenitcystinbuljong eller tetrathionat bouillon blive subkultiveret i et beriget medium. Så passerer den til selektive medier XLD og SS.

Analyse af totale og fækale coliformer

Det er et glimrende middel som indikator for fækal kontaminering.

Derfor er laktos bouillon ideel til den formodede fase af den koliforme undersøgelse ved hjælp af den mest sandsynlige talmetode.

For prøver, i hvilke et stort antal coliforme bakterier er mistanke lavere mængde deraf (1 ml) blev podet, mens det for prøver, hvor færre coliforme bakterier mere mistænkt prøvevolumen (10 ml) inokuleres.

Der foretages 10 fortyndinger til analysen^-1, 10^-2, 10^-3, danner et 3-5 rørbatteri for hver anvendt koncentration.

Fra hver fortynding såes det samme volumen til laktos bouillon.

Rørene inkuberes i 24 timer. De bouillon, der er negative, inkuberes i 24 timer mere.

Fortolkningen af ​​resultaterne sker ved at observere to karakteristika: den første er tilstedeværelsen eller fraværet af turbiditet, og da dette medium ikke indeholder en pH-indikator, vil der ikke være nogen farveændring.

Den anden er produktionen eller ej af gas. Gassen er let demonstreret i Durham-røret ved udseendet af en eller flere luftbobler indeni.

Det anses for positivt, hvis begge karakteristika observeres, det vil sige turbiditet med gasproduktion. Positive rør bør genudsås i bekræftende medier (bouillon Brilliant Green 2% Gald og EF-bouillon).

Kvalitetskontrol af mediet

- Ved fremstilling af mediet er det vigtigt ikke at glemme at placere Durhams-rørene, hvis formålet med det samme er undersøgelsen af ​​coliformer.

- Overophed ikke mediet før sterilisering.

- Fordel i reagensglas før sterilisering, aldrig efter.

- Må ikke anvendes, hvis mediet har mere end 3 måneders forberedelse.

- Brug ikke hvis du bemærker nogen ændring i medietes sædvanlige egenskaber.

- Ved tilberedning af et parti laktos bouillon testes kvaliteten af ​​det ved at plante stammer kendt som Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii og Klebsiella pneumoniae. De vokser meget godt, med gasproduktion (positiv kontrol).

- Det kan også omfatte Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, der vokser godt, men uden gasproduktion (negativ kontrol).

- Det skal bemærkes, at den oprindelige farve af det dehydrerede medium er beige, og at mediet fremstilles meget klart og gennemsigtigt gult. Hvis der er en ændring i farve eller udseende, kan der være forringelse af det samme.

referencer

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologi og miljømikrobiologi. (2013) 1. udgave. University of Cartagenas, Colombia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. (2009). Teknikker til mikrobiologisk analyse af fødevarer. 2. udgave Fakultet for Kemi, UNAM. Mexico.
3. Laboratorier Conda Pronadisa. 2017. Lactose bouillon dobbelt koncentration (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Sammenligning af teknikker til udvinding af coliforme bakterier fra søets sediment af Xochimilco, Mexico. Rev. argent. Microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. Tilgængelig på: scielo.org.
5. Sotomayor F, V Villagra, Cristaldo G, Silva L, Ibanez L. Bestemmelse af mikrobiologiske kvalitet af vand fra artesiske afdelinger bydele, Cordillera og kommune Capital. Mem. Inst. Investig. Cienc. sundhed 2013; 11 (1): 5-14. Tilgængelig fra: scielo.iics.