Selenit bouillon fundament, forberedelse og anvendelser



den selenit bouillon Det er et selektivt flydende kulturmedium. Det blev designet af Leifson til berigelse af prøver, hvor forekomsten af ​​enteropatogene bakterier af slægten Salmonella er mistænkt..

Dette middel opfylder kravene i den amerikanske Public Health Association (APHA), og derfor er accepteret til undersøgelse af Salmonella i afføringsprøver, urin, væske eller fast føde, vand, etc..

Den kemiske sammensætning, som den besidder, favoriserer genopretningen af ​​disse mikroorganismer og hæmmer igen væksten af ​​andre. Det er hovedsageligt giftigt for de fleste bakterier, der tilhører Enterobacteriaceae-familien. Det tillader dog også genopretning af Shigella-stammer og hæmmer ikke væksten af ​​Pseudomonas og Proteus..

Den består af vandfri natriumhydrogen selenit, vandfrit natriumphosphat, peptoner og lactose. Der er også en variant, hvormed cystin tilsættes, derfor dets selenit-cystin bouillon.

På nuværende anvendelse af Selenite cystin bouillon foretrækkes, eftersom højere procentdel genvinding ækvivalent med den observeret med andre selektive medier til samme formål Salmonella, såsom natriumtetrathionat bouillon opnås.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 - Selena
    • 2.2-Forberedelse af det kommercielle medium
    • 2.3 Variant selenit-cystin bouillon
  • 3 anvendelser
  • 4 Frø
  • 5 Kvalitetskontrol
  • 6 begrænsninger
  • 7 referencer

fundament

Peptonerne indeholdt i bouillon tjener som næringsstoffer til den rette udvikling af mikroorganismer. Salmonella stammer bruger peptoner som en kilde til nitrogen, vitaminer og aminosyrer.

Lactose er det fermenterbare carbonhydrat, hvorimod natriumselenit er inhibitoren, der bremser væksten af ​​grampositive bakterier og de fleste bakterier i tarmfloraen, navnlig af familien Enterobacteriaceae. Natriumphosphat er den buffer, der stabiliserer mediumets pH.

I tilfælde af selenit bouillonvarianten indeholdende L-cystin er denne yderligere forbindelse et reduktionsmiddel, der minimerer toksiciteten af ​​selenit, hvilket øger genopretningen af ​​salmonella.

forberedelse

-Selenit bouillon

Hvis du har komponenterne i blandingen, kan du veje:

4 g vandfri natriumhydrogen selenit.

10 g vandfrit natriumphosphat.

5 gr af peptoner.

4 g lactose.

Opløs forbindelserne i 1 liter sterilt destilleret vand. Det kan opvarmes let for at opløse i sin helhed.

Nogle laboratorier udsætter mediet i 10 minutter i flydende damp for at sterilisere det, da autoklave ikke bør anvendes. Hvis mediet er steriliseret, kan det opbevares i køleskab, indtil det anvendes.

Den kan også fremstilles uden sterilisering og tjener direkte 10 til 15 ml til de sterile reagensglas.

I dette tilfælde skal det hvile og bruges straks. Da mediet ikke er sterilt, kan det ikke opbevares i køleskab til senere brug.

-Fremstilling af det kommercielle medium

Hvis det kommercielle medium er tilgængeligt, vejes 23 g af det dehydratiserede medium og opløses i 1 liter sterilt destilleret vand. Varm kort for at afslutte opløsningen. Steriliser ikke i en autoklav. Server aseptisk 10 eller 15 ml i sterile reagensglas.

Den endelige pH i mediet bør være 7,0 ± 0,2.

Det skal bemærkes, at farven på det dehydrerede medium er beige, og præparatet er klart og gennemskinneligt ravt.

Variant selenit-cystin bouillon

Den indeholder de samme forbindelser af selenit bouillon, men 10 mg cystin tilsættes. Resten af ​​proceduren er nøjagtig den samme som beskrevet ovenfor.

applikationer

Dette medium er specielt til brug i epidemiologiske undersøgelser, i tilfælde hvor sygdommen ikke er i dets akutte stadium, asymptomatiske patienter eller sunde bærere.

Isolationen af ​​salmonella-slægten er normalt vanskelig, da de sædvanligvis findes at forurene prøverne på en knappe måde. At være i små mængder er let overlappet af væksten af ​​anden bakteriel genera, som findes i større mængde.

På den anden side er råmaterialet, som forarbejdede fødevarer behandles, ofte udsat for varme, dehydreringsprocesser, blandt andet blandt andet desinfektionsmidler, strålings- og konserveringsmidler..

Derfor er de salmonellaser, der er til stede i råmaterialet, mishandlet ved indgivelse af produktet til ovennævnte industrielle processer. På samme måde kan stammerne være svage i tilfælde af kliniske prøver som feces, hvis de kommer fra patienter, der er blevet behandlet med antibiotika..

Derfor vil enhver prøve, hvor tilstedeværelsen af ​​Salmonella er mistænkt for at være præ-berigede i lactose bouillon, og efterfølgende beriges i selenit optimere genvinding selektiv, såsom SS agar agar xylose medier, lysin deoxycholat (XLD ), enterisk Hektoen agar (HE) og grøn-lys agar, blandt andre.

plantet

Til afføring prøver 1 g prøve og suspenderes i et rør med 10 til 15 ml selenit bouillon. Hvis afføringen er flydende, skal du tage 1 ml og suspendere i bouillon. For rektal swabs, afløb swab materiale i bouillon.

I prøver af fastfood tager 1 gr og suspenderes i selenit bouillon.

I flydende fødevarer blandes i lige store dele med selenitvæsken i dobbelt koncentration.

For urinprøver centrifuge, kassér supernatanten, tag alt sedimentet og suspender det i selenit bouillon.

Bønden inkuberes ved 37 ° C i 24 h inkubation. Bakteriel vækst er påvist ved turbiditet. Et yderligere rør pr. Prøve kan også indbefattes for at inkubere ved 42 ° C. Derefter sår selektive faste medier fra selenit bouillon.

Kvalitetskontrol

For at kontrollere sterilitet inkuberes en selenit bouillon fra hvert parti uden podning ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes, at der ikke er uklarhed eller ændring af farve på mediet.

For at styre mediumets gode funktion kan kendte stammer anvendes, såsom:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 og Proteus mirabilis ATCC 43071.

De forventede resultater er:

  • For de første tre bakteriestammer skal væksten være tilfredsstillende.
  • til Escherichia coli delvis inhibering.
  • Til Proteus moderat vækst.

begrænsninger

Medium selenit bouillon er giftig for menneskers hud, derfor bør direkte kontakt undgås.

referencer

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Living-Rosel M, fransk-Monsreal J. Sammenligning dyrkningsmedier natriumselenit og natriumtetrathionat, inkuberet ved både 37 ° C og 42 ° C i isoleringen af Salmonella afføring af bærere afføring. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratorier Britania. Selenito Caldo. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenito bouillon Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Mikrobiologisk isolering af Salmonella spp. og molekylære værktøjer til dets påvisning. Sundhed, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Tilgængelig fra: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.