Soy bouillon tripticaseína foundation, forberedelse og anvendelser



den soja bouillon tripticaseína Det er et flydende kulturmedium, meget nærende og ikke-selektivt. På grund af sin store alsidighed er det et af de mest anvendte flydende kulturmedier i mikrobiologilaboratoriet.

Det er også kendt som bouillon tripticasa soja eller fordøjet kasein-soja, hvis forkortelse er TSB for sin akronym på engelsk Tryptisk er jeg Broth eller CST for sin akronym på spansk. Dens brug er meget varieret på grund af dets sammensætning. Den består af triptein, sojapepton, natriumchlorid, dipaliumphosphat og glucose.

Det er i stand til at reproducere klinisk vigtige patogene bakterier, herunder dem, der er ernæringskrævende og anaerobe bakterier. Nogle opportunistiske svampe og forurenende stoffer kan også udvikle sig i dette miljø.

På grund af sin høje næringsevne har den høj følsomhed til at detektere mikrobiel kontaminering, og den blev derfor valgt af USDA Animal and Plant Health Inspection Service til mikrobiologisk analyse af vacciner..

På samme måde opfylder tripticase sojasuppe kravene i de forskellige farmakopier (europæisk EP, japansk JP og nordamerikanske USP) til mikrobiologisk undersøgelse af produkter på industrielt niveau, såsom kosmetik og mad.

På den anden side er det værd at nævne, at på trods af det store anvendelighed er dette medium relativt billigt, så det er overkommeligt for de fleste mikrobiologiske laboratorier. Det er også meget nemt at forberede.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 Trypticamin sojabønne
    • 2.2 -varianter af tripticasein soy bouillon
  • 3 Brug
  • 4 Frø
  • 5 Kvalitetskontrol
  • 6 begrænsninger
  • 7 referencer

fundament

Triptinen, peptonen og glukosen giver ham de væsentlige nærende egenskaber for at gøre det til et ideelt medium for en hurtig mikrobiell udvikling.

Ca. 6 til 8 timers inkubation kan allerede ses vækst i de fleste mikroorganismer. Der er dog langsomt voksende stammer, som kan vare i dagevis vækst.

Natriumchlorid og dipaliumphosphat virker som henholdsvis osmotisk ligevægt og pH-regulator. Tilstedeværelsen af ​​vækst fremgår af forekomsten af ​​turbiditet i mediet; hvis der ikke er nogen vækst forbliver mediet gennemsigtigt.

På grund af sin lyse farve er det muligt at observere produktionen af ​​pigmenter, som den, der er vist på billedet, der er placeret i begyndelsen af ​​artiklen, hvilket svarer til pigmentet produceret af Pseudomonas aeruginosa. 

forberedelse

-Tryptisk sojabønne bouillon

Til fremstilling af tripticase soy bouillon vejer 30 gram af det dehydrerede kommercielle medium i digital skala. Derefter opløses det i en liter destilleret vand indeholdt i en fiola.

Blandingen får stå i 5 minutter og bringes derefter til en varmekilde for at hjælpe med opløsningen af ​​mediet. Det skal rystes ofte under kogning i 1 minut.

Når den er opløst, fordeles den i rør af passende størrelse efter behov. Rør med bomuldsstik eller bakelithætter kan bruges. Efterfølgende steriliseres rørene med mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Mediumets pH bør være 7,3 ± 0,2

Det skal tages i betragtning, at farven på det dehydreret kulturmedium er lys beige og bør opbevares ved 10 til 35 ° C på et tørt sted. Mens den fremstillede bouillon er lys rav og bør opbevares i køleskab (2 til 8 ° C).

-Variationer af tripticasein soy bouillon

Trypticaminmodificeret sojabølle kan fremstilles ved at tilføje galdesalte og novobiocin for at gøre det selektivt til isolering af E. coli. En anden mulighed for det samme formål er at tilberede tripticase sojabølgning suppleret med vancomycin, cefixime og tellurit (2,5 μg / ml).

På den anden side kan mere glucose (0,25%) tilsættes til trypticasein soy bouillon, når målet er at stimulere dannelse af biofilm.

brug

Det er nærende nok til at tillade vækst af krævende eller irriterende bakterier som f.eks Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp og Brucella sp, ingen grund til at supplere med blod eller serum.

Ligeledes kan nogle svampe udvikle sig i denne bouillon, som f.eks Candida albicans kompleks, Aspergillus sp og Histoplasma capsulatum.

Desuden er dette medium under anaerobe betingelser ideelt til at genvinde bakterier, der tilhører Clostridium-slægten, såvel som anaerobe ikke-sporulerede bakterier af klinisk betydning..

Hvis tilsat, kan 6,5% natriumchlorid anvendes til vækst af Enterococcus og anden gruppe D Streptococcus.

På forskningsniveau har det været meget nyttigt i forskellige protokoller, især i studiet af bakterier, der danner biofilmer eller biofilmer. Det bruges også til at fremstille bakteriesuspensionen på 0,5% af Mac Farland, der er nødvendigt for at udføre antibiogrammet ved hjælp af Kirby og Bauer.

I dette tilfælde tages 3 til 5 kolonier med lignende udseende og emulgeres i 4-5 ml trypticasein soy bouillon. Den inkuberes derefter i 2 til 6 timer ved 35-37 ° C og justeres efterfølgende til den ønskede koncentration under anvendelse af steril saltvand. Trypticase soy bouillon bør ikke anvendes i 18-24 timer inkubation.

plantet

Prøven kan sås direkte eller subkultiverede rene kolonier taget fra selektive medier. Inokulumet skal være lille for ikke at skyde mediet før inkubation.

Inkuberer normalt ved 37 ° C i aerobiose i 24 timer, men disse betingelser kan variere afhængigt af den ønskede mikroorganisme. Den kan også inkuberes under anaerobe betingelser ved 37 ° C i flere dage, hvis det er nødvendigt. For eksempel kan krævende eller langsomt voksende mikroorganismer inkuberes op til 7 dage.

I den mikrobiologiske analyse af farmaceutiske stoffer - som vacciner - er protokollerne strengere. I disse tilfælde kasseres bouillon uden vækst ikke, før den når 14 dage med kontinuerlig inkubation.

Kvalitetskontrol

For hver batch, der fremstilles, bør 1 eller 2 rør inkuberes uden podning for at demonstrere sterilitet. Det skal forblive uændret.

Du kan også plante kendte stammer for at evaluere deres adfærd. Blandt de stammer der kan bruges er:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 eller 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I alle tilfælde skal væksten være tilfredsstillende under de betingelser for atmosfære og temperatur, der er passende for hver mikroorganisme.

begrænsninger

-Gæringen af ​​glucose forårsager nedsættelsen af ​​mediumets pH ved fremstilling af syrer. Dette kan være ugunstigt for overlevelsen af ​​nogle mikroorganismer, der er følsomme for surhedsgrad.

-Det anbefales ikke til vedligeholdelse af stammer, fordi bakterierne efter nogle få dage udtømmer næringsstoffer med den deraf følgende ophobning af giftige stoffer, der gør miljøet ugjestabelt.

-Pas på alle sterilitetsprotokoller, da bouillonerne let er forurenet.

-Efter forberedelse af tripticasein forsøger sojabønner ikke at overføre bouillon til et andet sterilt rør, fordi denne type manøvrer er meget sårbar overfor forurening.

referencer

  1. Cona E. Betingelser for et godt følsomhedsundersøgelse ved agar diffusionstest. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Tilgængelig på: scielo.org
  2. British Laboratory Trytine soja bouillon. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  3. MCD Laboratory. Trytica soja bouillon. Tilgængelig på: electronic-systems.com
  4. Neogen laboratorium. Soy Broth Triptych. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluering af teknikken for magnetisk immunoseparation til nyttiggørelse af Escherichia coli O157: H7 i mælkekrem. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Tilgængelig på: scielo.org.ve
  7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm dannelse i isolerede Staphylococcus aureus ifølge antimikrobiel modtagelighed og klinisk herkomst. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Tilgængelig på: saber.ucv.ve
  8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolering af Escherichia coli O157: H7 i afføring Prøver af dobbeltformet kvægkvæg fra Miranda Kommune, Zulia State, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Tilgængelig på: scielo.org