Tetrathionat bouillon fundament, forberedelse og anvendelser



den tetrerende bouillon eller TT bouillon er et selektivt flydende dyrkningsmedium til berigelse og genopretning af Salmonella-stammer. Det blev oprettet af Müeller og senere ændret af Kauffmann, derfor er der dem der kalder det Müeller-Kauffmann bouillon.

Det oprindelige medium indeholdt proteosepeptoner, calciumcarbonat og natriumthiosulfat. Kauffmann tilføjede galdesalte og skabte en anden modalitet med lyse grønne. Disse stoffer hæmmer væksten af ​​coliformer, hvilket efterlader det frie medium til udvikling af patogene bakterier, i dette tilfælde Salmonella.

Modifikationen var meget vellykket, fordi det øgede mediefølsomheden signifikant. Derfor er det i øjeblikket nyttigt til søgning af Salmonellaer i enhver form for prøve, men især til fast eller flydende fæces og mad..

Dens forberedelse består af to faser; det kommercielle medium er en base til fremstilling af tetrathionat bouillon, og efterfølgende til dannelse af tetrathionatet tilsættes en iodiseret iodopløsning for at fuldende mediet.

Den amerikanske Public Health Association (APHA) anbefaler brug af tetrathionat bouillon suppleret med lyse til berigelse af Salmonella prøver til grøn, da det er mere selektiv end den tetrationate og selenit.

Generelt tetrationate er ideel, når tilstedeværelsen af ​​Salmonella-bakterier i små mængder er mistanke om eller er ramt af udsættelse for inhibitorer eller industrielle processer, der minimerer deres levedygtighed.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 - Tetrathionat
    • 2.2 -Variante tetrathionat bouillon med lysegrøn
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 anbefalinger
  • 6 referencer

fundament

De nuværende peptoner svarer til kasein pankreatisk fordøjelse og peptisk fordøjelse af animalsk væv. Disse giver kilden til kulstof, nitrogen og næringsstoffer generelt for bakteriel vækst.

Natriumthiosulfat reagerer med den ioderede opløsning for at danne tetrathionat. Dette inhiberer væksten af ​​coliforme bakterier og fremmer udviklingen af ​​bakterier indeholdende det reduktaseenzymet tetrathionat, herunder slægten Salmonella er, men også Proteus.

Galdesalte virker også som et hæmmende stof af de fleste Gram-positive bakterier og nogle Gram-negative bakterier (coliformer).

Calciumcarbonat absorberer de giftige stoffer, der genereres ved nedbrydning af tetrathionat, som danner svovlsyre. I denne forstand neutraliserer calciumcarbonat surhedsgraden, der opretholder pH i det stabile medium.

I tilfælde af den lyse grønne modalitet øger dette stof selektive kraften af ​​tetrathionat bouillon ved at hæmme andre andre mikroorganismer end slægten Salmonella..

forberedelse

-Tetrering bouillon

Jod iodopløsning

beklagelse:

  • 6 g jod.
  • 5 g kaliumiodid.

Kaliumiodidet opløses i ca. 5 ml sterilt destilleret vand, hvorefter iodet tilsættes lidt efter lidt, mens blandingen opvarmes. Efter at den er helt opløst, fyldes den med sterilt destilleret vand, indtil det når et slutvolumen på 20 ml.

Halvbasis for tetrathionat bouillon

Vægt 46 gram af dehydratiseret medium og suspender i 1 liter sterilt destilleret vand. Bland og varme til helt opløst, det kan koge i kun et par minutter. Steriliser ikke i en autoklav. Midlet af mediet får lov at afkøle til ca. 45 ° C, og på den tid tilsættes 20 ml af den ioderede opløsning..

Efter tilsætning af opløsningen skal iodurada til mediet anvendes straks. Hvis du ikke vil bruge hele blandingen, fortsæt som følger:

10 ml af basismediet fordeles i rør, og kun 0,2 ml af den ioderede opløsning sættes til dem, som skal podes med prøver..

De, der ikke skal bruges, kan stadig opbevares i køleskab, men som mediet ikke steriliseres, er idealet at forberede det nøjagtige nødvendige beløb..

Farven på mediet før tilsætning af den ioderede jodopløsning er mælkhvid med hvidt bundfald, og efter tilsætning er det brun med et tæt bundfald. Det observerede bundfald er normalt og svarer til calciumcarbonat, der ikke opløses. Den endelige pH i mediet er 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionat bouillonvariant med lysegrøn

For at fremstille tetrathionat bouillon med lyse grønne udføres alle de ovenfor beskrevne trin, men derudover tilsættes 10 ml af den lyse grønne opløsning fremstillet til 0,1% til blandingen..

Lysegrøn

Denne opløsning fremstilles som følger:

Afvej 0,1 g lysegrøn og suspender i 100 ml destilleret vand. Opvarm til kogning for at opnå total opløsning. Gem i gule flaske.

brug

For afføring prøver (afføring kultur) protokollen er som følger:

Inokuler 1 g fast afføring eller 1 ml flydende afføring i et rør med 10 ml klar til brug tetrathionat bouillon. Ryst kraftigt og inkuber i aerobiosis ved 43 ° C i 6-24 timer.

Derefter tages en aliquot på 10 til 20 μl bouillon og subkultur i en medium selektiv til Salmonella, såsom SS agar, XLD agar, lysegrøn agar, Hektoen enterisk agar, blandt andre..

Parallelt skal selektive medier til Salmonella inokuleres med den direkte prøve (afføring) uden berigelse. For prøver af rektal swabs, download materialet opsamlet i røret og fortsæt som beskrevet ovenfor.

Ved madprøver vejer 10 g fast mad eller 10 ml flydende mad og inokulerer en flaske med 100 ml klar til brug tetrathionat bouillon. Fortsæt på samme måde som beskrevet ovenfor, men inkuber ved 37 ° C.

Som det kan ses, vil forholdet mellem prøven og bouillon altid være 1:10.

Kvalitetskontrol

For at teste dyrkningsmediet kan kendte kontrolstammer anvendes. De mest anvendte er ATCC-certificerede stammer.

De stammer, der skal anvendes, er Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

For Salmonella stammer forventes en fremragende udvikling, mens Escherichia coli kan have en svag eller regelmæssig udvikling, og Gram-positive stammer (Enterococcus og Staphylococcus) hæmmes helt eller delvis.

anbefalinger

-Da dette medium ikke hæmmer væksten af ​​Proteus, bruger nogle laboratorier 40 mg / l novobiocin for at forhindre udviklingen af ​​denne mikrobielle stamme. Antibiotika bør tilsættes før den iodiserede jodopløsning.

-Efter tilberedning af mediet, herunder den ioderede opløsning af iod, bør den ikke være mere end 2 timer efter podning.

-I øjeblikket at fordele mediet i rørene, skal blandingen homogeniseres kontinuerligt for at resuspenge det dannede præcipitat.

-I mindre forurenede prøver inkuberes tetrathionat bouillon ved 35-37 ° C, og i stærkt forurenede prøver anbefales inkubation ved 43 ° C..

referencer

  1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Tetrathionat bouillonbasen ifølge Müeller-Kauffmann. Fås i:
  2. BD Laboratories 2003. Tetrathionat Broth Base. Fås i:
  3. Laboratorier Britania. 2015. Tethionat bouillon base. Fås i:
  4. Media BBL. 2005. Tube præparater til dyrkning af Salmonella arter.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Living-Rosel M, fransk-Monsreal J. Sammenligning dyrkningsmedier natriumselenit og natriumtetrathionat, inkuberet ved både 37 ° C og 42 ° C i isoleringen af Salmonella spp af bærestole. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220