Agar EMB foundation, forberedelse og brug



den EMB agar er et selektivt og differentielt fast dyrkningsmedium, der anvendes til isolering af gramnegative baciller, hovedsagelig af familien Enterobacteriaceae og andre ikke-krævende gramnegative baciller. Det er også kendt af akronymet EAM, hvilket betyder eosin-methylenblåt.

Dette medium blev oprettet af Holt-Harris og Teague i 1916. Det indeholder pepton, lactose, saccharose, dipaliumphosphat, agar, eosin, methylenblåt og vand. Det er meget lig MacConkey, især hvis Levine EMB-agar modificeret ved ikke at indeholde saccharose anvendes.

Faktisk beslutter hvert laboratorium, om det virker med den ene eller den anden, da de opfylder samme funktion, selvom de biokemisk er forskellige.

Det giver endda den samme ulempe som den klassiske MacConkey-agar i form af swarming produktion af slægten Proteus. For at undgå dette fænomen kan du derfor øge koncentrationen af ​​agar op til 5%.

indeks

  • 1 Foundation
    • 1.1 Selektiv
    • 1.2 Differential
  • 2 Fremstilling
  • 3 anvendelser
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Endelige overvejelser
  • 6 referencer

fundament

selektiv

EMB agar er subtilt selektiv, fordi den indeholder aniliniske farvestoffer (eosin methylen blå), der virker som inhibitorer, forebyggelse af væksten af ​​de fleste Gram-positive bakterier og nogle gramnegative bakterier krævende.

Denne agar har imidlertid den ulempe, at nogle Gram-positive bakterier kan modstå tilstedeværelsen af ​​de hæmmende stoffer og vokse som små farveløse punktlignende kolonier, såsom Enterococcus faecalis og nogle Staphylococcus.

Du kan også dyrke visse gær, som f.eks Candida albicans kompleks, Det vil give meget små rosa kolonier. Selv klamydosporer kan udvikles fra denne gær, hvis prøven er sådet med dybde.

forskellen

Desuden EMB agar er også et differentielt medium, da disse farvestoffer sammen (eosin methylen blå) har den egenskab at danne et bundfald i sur pH, således de tjener som indikatorer for produktion deraf.

Derfor producerer svagt gærende lactose- eller sucrosebakterier lilla kolonier i 24 til 48 timer. For eksempel slægten Klebsiella, Enterobacter og Serratia.

De bakterier, der stærkt fermenterer lactose, såsom Escherichia coli, eller saccharose, som Yersinia enterocolitica eller Proteus penneri, danner et grønt sort bundfald, hvilket giver en metallisk glanskarakteristik i disse arter.

Det skal bemærkes, at hvis EMB levinmediet anvendes (uden saccharose), Yersinia enterocolitica og Proteus penneri de vil producere gennemsigtige kolonier.

Bakterier fermenterer ikke lactose eller saccharose føres ved tilstedeværelsen af ​​peptoner, tilvejebringelse aminosyrer og nitrogen i bakterievækst, og producere gennemsigtige kolonier. For eksempel, Salmonella og Shigella-slægten, blandt andre.

Det er også vigtigt at bemærke, at slægten Acinetobacter kan have lavendel blå kolonier, men ikke fermentor lactose eller saccharose, men har den egenskab fastsættelse af methylenblåt i deres cellevæg. Dette kan også ske med andre oxidative bakterier.

forberedelse

Det oprindelige dehydrerede medium er lys beige.

For at forberede dette dyrkningsmedium bør 36 gram af det dehydratiserede medium vejes og suspenderes i et hætteglas indeholdende 1 liter destilleret vand.

Efter at have forladt blandingen i 5 minutter i ro, bringes fiolaen til en varmekilde, blandes kraftigt og konstant, indtil det koger, og det er helt opløst..

Efterfølgende skal det opløste dyrkningsmedium steriliseres under anvendelse af autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

I slutningen af ​​tiden fjernes den fra autoklaven og efterlades kortvarigt. Derefter serveres den lige varm (45-50 ° C) mellem 15 og 20 ml agar i hver steril petriskål. Mediet bør være blå lakmus.

Efter servering er pladerne let afdækket, indtil agaren køler lidt. Så de er dækket og lov til at størkne helt. Senere bestilles de i en inverteret plakholder og opbevares i køleskab (8 ° C), indtil de anvendes.

Denne procedure udføres fortrinsvis i en laminær strømningshætte eller foran Bunsen-brænderen for at undgå forurening.

Det er vigtigt at huske på, at hvert kommercielt hus angiver det beløb, der skal vejes for at forberede kulturmediet.

Den endelige pH af mediet bør være 7,2 ± 0,2

applikationer

Dette medium bruges til at tilså urin og afføring eller nogen form for kliniske prøver, især hvis du har mistanke om tilstedeværelsen af ​​fordringsløse Gram-negative bakterier såsom baciller tilhørende Enterobacteriaceae familien, som vokser meget godt i dette medium.

De enteropathogene bakterier af slægten Shigella og Salmonella er kendetegnet ved deres farveløse eller lidt gule kolonier.

Andre ikke-fermenterende lactosebaciller vokser også, blandt andet Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Ligeledes er dette medium meget nyttigt i den mikrobiologiske analyse af mad og vand, da den er ideel til den fuldstændige bekræftende fase af bestemmelsen af ​​coliformer, det vil sige at bekræfte tilstedeværelsen af E. coli fra uklare EC-bouillon, fra den mest sandsynlige taleteknik (NMP).

Kvalitetskontrol

For at verificere, at det nyligt dyrkede kulturmedium fungerer godt, kan kontrolstammer plantes for at observere koloniernes egenskaber og verificere, at de giver som forventet.

Til dette er ATCC-stammer eller velidentificerede stammer af E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa og nogle gram-positive bakterier, som S. aureus.

Det forventes at E. coli Generer veludviklede blåhvide kolonier med grøn metallisk glans. Så længe, Enterobacter aerogenes og Klebsiella sp de skal give veludviklede slimhinde kolonier blålig-sort.

For sin del, Salmonella typhimurium og Shigella flexneri, de skal udvikle store kolonier, farveløse eller med en lille gul farve.

Endelig genren Pseudomonas aeruginosa det vokser som farveløse kolonier af uregelmæssig størrelse, mens gram-positive bakterier skal hæmmes fuldstændigt eller vokse sparsomt med meget små kolonier.

Endelige overvejelser

Sommetider forårsager steriliseringen methylenblåen at reducere, idet man observerer et orange medium. For at methylenblåen kan oxideres, og den lilla farve skal genvinde, skal den blandes forsigtigt, indtil farven genopstår.

Også efter steriliseringen kan udfældning af farvestoffet, så skal det blandes godt, før der serveres petriskålene.

referencer

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, B og Velazquez Serrano O. 2009. Teknikker til Mikrobiologisk Food Analysis. 2. udgave Fakultet for Kemi, UNAM. Mexico.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterisering og distribution af stammer af Escherichia coli Potentielt patogene isolater af kyllingekyllinger fra fjerkræplanter i Peru. Rev. undersøgelse. dyrlæge. Peru 2012 23 (2): 209-219. Tilgængelig på: scielo.org.
  3. Laboratorier Conda S.A. Eosin Agar og Methylen Blue. 2010. Tilgængelig på: condalab.com
  4. Laboratorier Britania. Levine E.M.B (Med Eosin og Methylenblå) 2011. Tilgængelig på: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin Methylen Blue Agar), Modificeret. 2013. Tilgængelig på: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial