Agar Endo fundament, forberedelse og brug



den Endo-agar eller medium Endo er et solidt, differentieret kulturmedium med en vis grad af selektivitet. Den oprindelige formel blev oprettet af Endo i 1904 for at differentiere laktose-fermenterende bakterier fra ikke-fermenterende bakterier. I starten blev det designet til isolering af Salmonella typhi, men senere vendte målet om mediet til søgen efter coliforme.

Princippet om Endo-agar er blevet opretholdt, men dets formulering har gennemgået utallige ændringer gennem årene. I øjeblikket er mediet sammensat af peptidfordøjet animalsk væv, lactose, dikaliumhydrogenphosphat, natriumsulfit, basisk fuchsin og agar.

Hovedbrug af mediet har været knyttet til isoleringen og differentieringen af ​​gramnegative baciller, der tilhører familien Enterobacteriaceae og til andre familier i nærheden..

I lang tid blev det brugt til påvisning af coliformer i vand-, mælke- og fødeprøver, men i dag er brugen af ​​dette medium blevet fordrevet af andre med lignende funktioner. Imidlertid bruger nogle mikrobiologiske laboratorier denne agar til isolering af Enterobacteriaceae fra prøver af klinisk oprindelse.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 Endo-agar
    • 2.2 Variant af agar m-Endo
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 begrænsninger
  • 6 referencer

fundament

Endo-agar indeholder peptoner, der tjener som en kilde til aminosyrer, nitrogen, kulstof og energi, der er nødvendige for væksten af ​​ubehagelige mikroorganismer.

På den anden side tilvejebringes agarens let selektive karakter ved tilsætning af natriumsulfit og basisk fuchsin; begge komponenter hæmmer helt eller delvis udviklingen af ​​de fleste gram-positive bakterier.

Differentielle karakter er givet ved tilstedeværelsen af ​​fermenterbart kulhydrat, som i dette tilfælde er lactose og basisk fuchsin, som også tjener som indikator for pH.

Gram-negative bakterier, der vokser på denne agar og er i stand til at fermentere lactose, vil danne stærke lyserøde kolonier; være pathognomonic of Escherichia coli dannelsen af ​​mørke røde kolonier med en grøn metallisk glans iriserende. Dette skyldes den høje produktion af syrer fra fermentering af kulhydrat.

Det skal bemærkes, at mediet der er omkring kolonierne også vender sig til en stærk lyserød farve. Mens ikke-fermenterende gram-negative baciller af lactose danner lysrosa kolonier svarende til medium eller farveløse.

Dipaliumhydrogenphosphat balancerer mediumets pH, og agar er komponenten, der giver den faste konsistens.

forberedelse

Endo Agar

Vejer 41,5 g af det dehydreret medium og opløses i 1 liter destilleret vand. Opvarm blandingen ved omrøring ofte indtil der er total opløsning af mediet. Steriliseres i autoklav ved 121 ° C ved 15 lb tryk i 15 minutter.

Når du fjerner fra autoklaven, lad den afkøle til en temperatur på ca. 45-50 ° C, ryst blandingen for at homogenisere, før du serverer. Hæld 20 ml i sterile petriskåle.

Lad pladerne størkne, invertere og opbevare i en kasse eller pakke med mørkt papir før opbevaring i køleskab. Det er meget vigtigt at beskytte forberedt medium fra direkte lys. En anbefalet praksis er at forberede det nøjagtige beløb, der skal bruges.

Hvis opbevares i køleskab, skal pladerne hærdes før brug.

Mediumets pH bør være mellem 7,2 og 7,6, og farven af ​​det fremstillede medium er lysrosa..

Variant agar m-Endo

Der er en anden version af Endo-agar (m-Endo), der følger formlen McCarthy, Delaney og Grasso, som indeholder flere forbindelser og varierer i vejen for forberedelsen..

Denne variant indeholder: lactose tryptose, fordøjet enzymatisk casein fordøjet enzym af animalsk væv, natrium, kalium dibasisk, natriumsulfit, gærekstrakt, monobasisk kaliumphosphat, basisk fuchsin, natriumdeoxycholat chlorid, laurylsulfat af natrium og agar.

I dette tilfælde vejer vi 51 g af det dehydrerede medium og suspenderer det i 1 liter destilleret vand indeholdende 20 ml ethanol.

Varm lidt under omrøring indtil mediet er helt opløst. Overophed ikke og steriliser ikke i en autoklav. Når blandingen er homogen, tjen i sterile petriskåle og lad det størkne.

brug

I nogle lande anvendes det stadig til optælling af totale og fækale coliformer i vand- og fødeprøver, især tilstedeværelsen af Escherichia coli som den vigtigste indikator for fækal kontaminering.

M-Endo Agar anbefales af American Public Health Association (APHA) til overvågning og kontrolprogrammer desinfektion og rensning af spildevand, samt ved vurdering af kvaliteten af ​​drikkevand.

Den mest anvendte metode er membranfiltrering efter anrikning af prøven med Lauryl sulfat bouillon i 2 til 4 timer.

Det kan også anvendes som en erstatning for EMB agar i mikrobiologisk analyse af fødevarer og vand til den mest sandsynlige antal teknik (NMP), specifikt i fuldstændig afvikling bekræftende at bekræfte tilstedeværelsen af E. coli fra uklare EC-bouillon.

Kvalitetskontrol

For at evaluere kvaliteten af ​​den fremstillede Endo-agarparti, sås kendte eller certificerede kontrolstammer.

Blandt de stammer der kan bruges til dette formål er: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 og Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Stammen sår ved udmattelse og inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiosis.

De forventede resultater er:

  • til Escherichia coli: kolonier stærkt rødt, med metallisk glans.
  • til E. cloacae og K. pneumoniae kolonierne skal være rosa mucoide.
  • I tilfælde af S. typhimurium, S. flexneri og P. mirabilis kolonierne er som regel lyserøde eller farveløse.
  • endelig, E. faecalis Det forventes at være delvis hæmmet, derfor skal væksten være dårlig med meget små kolonier af stærkrosa.

begrænsninger

-Endo-mediet har lav selektiv effekt, og det er derfor muligt, at nogle Gram-positive mikroorganismer såsom Staphylococcus, Enterococcus og lige gær kan vokse.

-Andre baciller, der ikke tilhører familien Enterobacteriaceae, kan udvikle sig i dette medium som for eksempel Pseudomonas sp og Aeromonas sp. Karakteristika for disse stammer er farveløse uregelmæssige kolonier.

-Dette fremstillede medium er meget følsomt for lys, derfor forværres en længerevarende eksponering for dette indikatorsystemet, irreversibelt skadeligt mediumet.

-Komponenterne i mediet betragtes som kræftfremkaldende, derfor bør direkte kontakt undgås.

-Det dehydrerede medium er meget hygroskopisk og bør opbevares i sin originale beholder ved stuetemperatur, tæt lukket og i et tørt miljø.

referencer

  1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedia, Den frie encyklopædi. 7. sep 2017, 08:27 UTC. 28. februar 2019, 22:55. Fås i: en.wikipedia.
  4. MercK laboratorium. Endo-agar 2019. Fås på: merckmillipore.com
  5. Laboratories Technical Sheet. M -Endo Agar LES. 2015. Tilgængelig på: liofilchem.net