Agar Hektoen fundament, forberedelse og brug



den Hektoen agar eller enterisk Hektoen-agar er et fast, selektivt og differentielt dyrkningsmedium. Det blev oprettet på Hektoen Institut af King og Metzger til isolering af enteropatogene bakterier af slægten Shigella og Salmonella..

Mediet består af proteosepepton, gærekstrakt, galdesalte, lactose, saccharose, salicin, natriumthiosulfat, natriumchlorid, jerncitrat, ammoniumcitrat, bromthymolblåt, sur fuchsin og agar. Denne formulering gør det muligt at differentiere slægten Shigella og Salmonella fra resten af ​​bakterierne, der er i stand til at vokse i dette medium.

Selv om der er andre midler med samme funktion som Hektoen agar, giver dette større fordel i forhold til andre midler, især når du vil genoprette Shigella-arter.

Arter af begge slægter producerer alvorlige gastrointestinale problemer hos mennesker på grund af forbruget af forurenet mad; derfor er transmissionen fecal - oral. Derfor er brugen af ​​Hektoen-agar primært angivet i den mikrobiologiske analyse af afføring og fødeprøver..

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 begrænsninger
  • 6 referencer

fundament

Hektoen agar indeholder peptoner og gærekstrakt som en kilde til næringsstoffer, der giver de væsentlige elementer til mikrobiell udvikling.

Men det har også galdesalte, der virker ved at hæmme væksten af ​​nogle bakterier, især Gram-positive og nogle Gram-negative. Det er af denne grund, at det betragtes som et selektivt medium.

På den anden side er Hektoen agar et differentielt medium. Denne egenskab bibringes af tilstedeværelsen af ​​fermenterbare carbonhydrater såsom lactose, sacarora og salicin med systemet pH-indikator, ved bromthymolblåt og sur fuchsin.

Alle bakterier, der er i stand til at vokse i dette medium, der ikke tilhører slægten Salmonella og Shigella, vil udvikle laks eller orange kolonier med undtagelse af slægten Proteus. Dette skyldes fermenteringen af ​​en eller flere af de foreliggende kulhydrater, som syrer mediet, hvilket får pH-indikatoren til at dreje.

I mellemtiden slægten Shigella og Salmonella er ude af stand til at fermentere nogen kulhydrater, der kun bruger peptoner som energikilde, som alkaliniseret medium og derfor er dens kolonier er grønne-blålig.

Også i dette medium kan man skelne bakterier i stand til at danne hydrogensulfid (farveløs gas). Natriumthiosulfat virker som en kilde til svovl, mens jerncitrat er det afslørende middel. Begge forbindelser gør det muligt at danne et sort bundfald af jernsulfid, der beviser reaktionen.

Det sorte bundfald i midten af ​​kolonien med et gennemsigtigt halo omkring giver et fiskøjeudseende. Denne egenskab antyder tilstedeværelsen af ​​slægten Salmonella.

Endelig opretholder natriumchlorid den osmotiske balance, og agar giver den faste konsistens til mediet.

forberedelse

Væg 76 g af det dehydratiserede medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Ryst blandingen kraftigt og lad den hvile i 10 til 15 minutter. Det kan opvarmes og koges, hvilket giver roterende bevægelser indtil dets totale opløsning. Dette medium er ikke autoklaveret.

Når mediet når en temperatur på ca. 45 ° C, hældes et volumen på 20 ml direkte i sterile petriskåle..

Agar får lov at størkne. På det tidspunkt er de klar til brug. Det anbefales at bruge dem med det samme. Hvis de ikke er mulige, skal de opbevares i køleskab, indtil de anvendes.

Pladerne skal fjernes tidligt fra køleskabet, før de plantes for at tage stuetemperatur.

Mediumets pH bør være 7,5 ± 0,2. Farven på det dehydrerede medium er lilla og fremstilles er brungrøn.

brug

Brugen af ​​Hektoen agar anbefales til søgning efter bakterier af slægten Shigella og Salmonella i afføring og fødeprøver..

evnen til at isolere disse bakterier, hvis prøven tidligere i særlige bouillon, såsom selenit, selenit cystin bouillon, tetrathionat bouillon, beriget væsentlige at forøge etc..

Inokulumet skal være stærkt, og såningen udføres ved striation. Pladerne inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiosis.

Inkubation anbefales i 48 timer, fordi koloniernes egenskaber er tydeligere for deres fortolkning og differentiering på dette tidspunkt.

Kvalitetskontrol

For at udføre kvalitetskontrol på dette medium anvendes certificerede bakteriestammer, såsom: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 og Shigella sonnei ATCC 25931.

De forventede resultater er følgende: Salmonella typhimurium og  Salmonella enteritidis de skal udvikle grøn blå kolonier med eller uden et sort center. Mens Shigella-arterne vil vokse som blågrønne kolonier.

Du kan også inkludere stammer af Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

I disse tilfælde er de observerede egenskaber følgende: E. coli og K. pneumoniae I dette medium udvikler de laks-til-orange kolonier med et bundfald af samme farve omkring dem. I mellemtiden udvikler Proteus blågrønne kolonier med eller uden et sort center.

mens S. aureus og  E. faecalis bør hæmmes, nogle gange E. faecalis klarer at vokse som gule kolonier, meget små.

På den anden side er det vigtigt at evaluere steriliteten af ​​mediet, fordi dette medium ikke steriliseres i en autoklav. Derfor bør hver batch, der fremstilles, inkuberes en til to plader uden at inokulere ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.

Det forventes naturligvis, at der ikke er nogen vækst på nogen måde på pladen.

begrænsninger

-Proteusarter kan udvikle sig i dette miljø, og egenskaberne af deres kolonier kan forveksles med salmonella- eller shigella-arter. Af denne grund skal enhver mistænkelig koloni bekræftes med biokemiske test.

-Det er nødvendigt at ledsage brugen af ​​dette medium med andre mindre selektive agarer, fordi hvis den ønskede mikroorganisme findes i lave koncentrationer, kan den ikke udvikle sig i dette medium.

-Må ikke overophedes under forberedelsen, da overdreven varme ændrer sammensætningen af ​​mediet.

-Usædvanligt laktose-fermenterende Salmonella kolonier kan forekomme ubemærket.

referencer

  1. Wikipedia bidragsydere. Hektoen enterisk agar. Wikipedia, den frie encyklopædi. 13. marts 2019, 23:38 UTC. Tilgængelig på: .wikipedia.org / Adgang til 16. marts 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Tilgængelig på: bd.com
  3. Laboratorier Britania. Hektoen Enteric Agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Tilgængelig på: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2. udgave. Fås i: bd.com/europe