Agar LIA (Lysine Iron) fundamentet, forberedelse og brug



den LIA agar (Lysine Iron) er en biokemisk test, der anvendes til at identificere bakterier fra familien Enterobacteriaceae. Dette medium blev skabt af Edwards og Fife, baseret på Falkows formel.

Oprindeligt var denne test en bouillon indeholdende peptoner, gærekstrakt, glucose, L-lysin, bromcresolpurpur og destilleret vand. Edwards og Fife tilsatte agar-agar, ferric ammoniumcitrat og natriumthiosulfat.

Prøven består i det væsentlige af at demonstrere tilstedeværelsen af ​​enzymet lysindecarboxylase, der er i stand til at reagere med carboxylgruppen i aminosyren L-lysin. En deaminering af aminosyren kan også forekomme på grund af tilstedeværelsen af ​​enzymet lysin deaminase.

Derudover tillader sammensætningen af ​​mediet at demonstrere kapaciteten hos nogle bakterielle slægter til fremstilling af hydrogensulfid. Endelig er det også muligt at observere generationen eller ej af gas i midten.

indeks

  • 1 Foundation
    • 1.1 Peptoner og gær ekstrakt
    • 1,2 Glucose
    • 1,3 L-lysin
    • 1,4 pH-indikator (bromocresol lilla)
    • 1,5 Ammonium ferriccitrat og natriumthiosulfat
  • 2 Fortolkning af testen
    • 2.1 Decarboxylering af lysin
    • 2.2 Deaminering af lysin
    • 2.3 Produktion af hydrogensulfid (H2S)
  • 3 Optagelse af resultater
  • 4 Fremstilling
  • 5 anvendelser
  • 6 referencer

fundament

Peptoner og gær ekstrakt

Ligesom de fleste kulturmedier indeholder jernlysinagar komponenter, som giver kilden til næringsstoffer, der er nødvendige for bakteriel vækst. Disse komponenter er repræsenteret af peptoner og gærekstrakt.

glucose

Også denne agar indeholder fermenterbar kulhydratglucose. Det er kendt, at alle bakterier fra familien Enterobacteriaceae fermenterer glucose.

Dette trin er afgørende, fordi det vil være ansvarligt for forsuring af mediet, en væsentlig betingelse for enzymet lysindecarboxylase, hvis det er til stede, for at virke på dets substrat.

I nogle bakterielle slægter kan gasproduktionen på grund af fermenteringen af ​​glucose observeres.

Gassen er bevist, når der er en forskydning af agar i røret, hvilket efterlader et tomt rum i bunden af ​​røret eller ved at bryde mediet i to eller flere portioner.

L-lysin

Når lysinen er decarboxyleret, dannes en diamin (cadaverin) og kuldioxid.

Decarboxylering forekommer i nærvær af coenzympyridoxalphosphat. Denne reaktion er irreversibel.

PH indikator (bromocresol lilla)

Alle ændringer af pH forekom i mediet ved de forskellige reaktioner, detekteres af bromocresol lilla pH-indikatoren.

I denne forstand, når der er forsuring, bliver mediet gult, og når der er alkalisering, vender mediet tilbage til den oprindelige lilla eller lilla farve.

Når deaminering af lysin forekommer ved tilstedeværelsen af ​​enzymet lysin deaminase, udgør en rødlig farve på overfladen, typisk i slægten Proteus, Providencia og nogle arter af Morganella.

Dette skyldes det faktum, at der under deamineringsprocessen dannes alfa-keto-carbonsyre, som reagerer med ammoniumcitrat i nærværelse af oxygen, hvilket bevirker den ovenfor nævnte farve.

Ammonium-ferrcitrat og natriumthiosulfat

På den anden side vil bakterierne, der producerer hydrogensulfid, blive påvist ved tilstedeværelsen af ​​natriumthiosulfat (kilde til svovl) og ferric ammoniumcitrat, som er udvikleren af ​​H2S.

Bakterier, der besidder thiosulfatreduktaseenzym, har evnen til at virke ved at reducere den tilstedeværende natriumthiosulfat, der danner sulfit og hydrogensulfid (H2S).

Sidstnævnte er en farveløs gas, men når den reagerer med jernsaltet, dannes det metalliske jernsulfid, som er en uopløselig forbindelse (synligt sort bundfald).

Imidlertid er kapaciteten af ​​H-dannelse2S med dette medium er ikke særlig pålidelig, fordi nogle negative lysin-decarboxylase-bakterier er i stand til at producere H2S vil ikke danne det sorte bundfald, fordi mediumets surhed forstyrrer. Derfor anbefales det at kontrollere med andre midler, der indeholder jern.

Fortolkning af testen

Decarboxylering af lysin

Rørene skal læses efter slutningen af ​​24 timers inkubation, ellers er der risiko for fejlfortolkning af reaktionen, rapportering af falske negativer.

Det skal huskes, at den første reaktion, der vil forekomme, vil være glukosens gæring, derfor bliver alle rør efter 10 til 12 timer gul.

Hvis en gult baggrund med en lilla eller lilla overflade i slutningen af ​​inkubationsperioden (24 timer) observeres, er reaktionen negativ. Den lilla farve på overfladen svarer til alkalisering af mediet ved brug af peptoner.

En positiv reaktion er en, hvor bunden og overfladen af ​​røret er helt lilla, det vil sige det vender tilbage til den oprindelige farve.

Derfor bestemmer hvem testens positivitet er bunden eller bunden af ​​mediet. Hvis du er i tvivl om farven, kan du sammenligne den med et ikke-inokuleret LIA-rør.

Deaminering af lysin

Et rør, der beviser deaminering af lysin, vil have en rødbrun overflade og en gul baggrund (syre) eller hele det rødbrune rør..

Denne reaktion fortolkes som negativ for dekarboxyleringen af ​​lysin, men positiv for deaminering af lysin.

Denne reaktion er defineret og fortolket i skråningen.

Fremstilling af hydrogensulfid (H2S)

En positiv reaktion observeres ved udseendet af et sort bundfald i hele eller en del af mediet. Generelt mellem skrågrænsen og bunden.

Hvis bundfaldet forekommer i hele røret, vil det ikke vise de andre reaktioner, der forekommer i mediet.

Optagelse af resultaterne

Ved fortolkningen af ​​testen registreres resultaterne som følger:

Læs først skråningen, så bunden eller taco, så produktionen af ​​H2S og endelig gasproduktion.

Eksempel: K / A + (-). Det betyder:

  • K: Alkalisk bezel (lilla)
  • A: Acid (gul) baggrund, det vil sige negativ dekarboxyleringsreaktion og negativ deaminering.
  • +: Fremstilling af hydrogensulfid
  • (-): Uden gas.

forberedelse

Vejes 35 g af det lysinagardehydreret jern og opløses i en liter destilleret vand.

Varm, indtil agar er helt opløst, så kog det i et minuts omrøring ofte. Fordel 4 ml mediet i 13/100 reagensglas med bomuldslåg.

Steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og lad hvile på en skrå måde, på en sådan måde, at der er en dyb base og en kort afskærmning.

Opbevares i køleskab 2-8 ° C. Tillad til temperament før plantning af bakteriestammen.

Farven på det dehydrerede medium er beige, og mediet fremstilles rødlig lilla farve.

Den endelige pH af det fremstillede medium er 6,7 ± 0,2.

Mediet bliver gul med pH lig med eller mindre end 5,2 og lilla ved pH 6,5 op.

applikationer

Denne test, sammen med andre biokemiske test, bruges til at identificere baciller fra familien Enterobacteriaceae..

Mediet er sået med en lige sløjfe eller en nål, en eller to slag er lavet til bunden af ​​røret, og så er overfladen af ​​mediet zigzagged.

Det inkuberes i 24 timer ved 35-37 ° C i aerobiose. Om nødvendigt forlades det at inkubere i 24 timer mere.

Det er især nyttigt at differentiere Negative Citrobacter lactose arter fra Salmonella sp.

referencer

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske test til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratorier Britania. Lysin jern agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Tilgængelig på: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Tilgængelig på: andinamedica.com