Agar M.R.S fundament, forberedelse og anvendelser



den agar M.R.S. er et selektivt fast dyrkningsmedium, der anvendes til isolering og tælling af mælkesyrebakterier, især af slægten Lactobacillus. Denne agar blev oprettet i 1960 af Man, Rogosa og Sharpe, mellemlageret samme navn, men på grund af dets kompleksitet anvendes forkortelsen M.R.S ofte..

Det er sammensat af proteosepepton, kødekstrakt, gærekstrakt, glucose, sorbitanmonooleat, dikaliumphosphat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat og agar.

Denne sammensætning tillader en hensigtsmæssig udvikling af mælkesyrebakterier fra kliniske prøver, såsom afføring, vaginale sekreter, bryst mælkeprøver og oral samt kød og mejeriprodukter.

Det anvendes ikke rutinemæssigt i kliniske laboratorier, fordi mælkesyrebakterier sjældent er involveret i patologiske processer. Imidlertid er anvendelsen af ​​M.R.S agar hyppigere inden for fødevaremikrobiologi..

På den anden side anvendes dette medium af nogle forskningscentre, hvis formål er undersøgelsen af ​​mælkesyrebakterier.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Karakteristika for kolonierne
    • 3.2 Isolering af mælkesyrebakterier
    • 3.3 Tælling af mælkesyrebakterier
    • 3.4 På forskningsniveau
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 referencer

fundament

Agar Man, Rogosa og Sharpe har en ret kompleks sammensætning. Ved at nedbryde den funktion, som hver af dens komponenter opfylder, kan dens fundament forklares.

Proteospepton, kødekstrakt, gærekstrakt og glukose er næringsstoffer, som giver kilden til kulstof, nitrogen, vitaminer og mineraler, der er nødvendige for bakteriel vækst. Derudover er glucose den universelle energikilde, der anvendes i de fleste kulturmedier.

Endvidere at fremme væksten af ​​mælkesyrebakterier, er det nødvendigt tilstedeværelsen af ​​cofaktorer (kationer) uundværlig i metabolismen af ​​Lactobacillus og beslægtede bakterier; Disse forbindelser er natrium-, magnesium- og mangansaltene.

Ligeledes er sorbitanmonoleat eller polysorbat 80 en kilde til vigtige fedtsyrer, når de absorberes som næringsstoffer.

Derudover virker sorbitanmonoleat og ammoniumcitrat ved at hæmme udviklingen af ​​den ledsagende flora, især gramnegative bakterier, hvilket tilvejebringer selektiv karakter af denne agar.

Endelig er agar-agar hvad der giver den faste konsistens til mediet.

Der er andre varianter af Man Rogosa Sharpe agar; en af ​​dem er den ene suppleret med cystein (M.R.S.c), meget nyttig til isolering af bifidobakterier, blandt andre mikroorganismer. På den anden side er MRS-medium suppleret med neomycin, paromomycin, nalidixinsyre og lithiumchlorid, især til selektiv tælling af bifidobakterier i mejeriprodukter.

forberedelse

Vægt 68,25 gram det dehydrerede medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Lad stå i 5 minutter. For at opløse i sin helhed, bringes til en varmekilde omrøring ofte og lad koge i 1 til 2 minutter. Steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Når du forlader autoklaven, lad det stå et par minutter og distribuere stadig varmt i sterile petriskåle.

Tillad at størkne og invertere pladerne, bestil i plaquers og opbevar i køleskabet indtil brug. Lad pladerne tage stuetemperatur, inden de tages i brug.

Mediumets pH bør være 6,4 ± 0,2. Nogle kommercielle huse anbefaler pH mellem 5,5 og 5,9.

Det dehydrerede medium er beige og fremstilles er mørkt gult.

Både det dehydrerede medium og de fremstillede plader skal opbevares ved 2 til 8 ° C.

applikationer

Agarpladerne M.R.S. de kan sås på overfladen (udmattelse eller med en spatel af Drigalski). Det kan også sås med dybde. Pladerne bør inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofile (4% O2 og 5-10% CO2) i 24 til 72 timer.

Såningsmetoden vælges i henhold til formålet (isolering eller tælling).

Karakteristika for kolonierne

De formodede kolonier af Lactobacillus vokser hvidligt og har et mucoid eller cremet udseende på dette agar. Så skal de identificere.

Isolering af mælkesyrebakterier

Til dette formål anvendes plantningen ved overflade. De prøver, der skal plantes, kræver en tidligere procedure. 

I tilfælde af modermælksprøver anbefales det at centrifugere 1 ml af prøven ved 14.000 rmp i 10 minutter for at fjerne fedtlaget. 900 μl kasseres, og i de resterende 100 μl suspenderes sedimentet og hældes på M.R.S. Derefter skal det fordeles jævnt med en spatel af Drigalski.

I tilfælde af afføringsprøver vejes et (1) gram fæces og homogeniseres i 9 ml 0,1% sterilt peptoniseret vand svarende til en 1/10 fortynding. Derefter foretages serielle fortyndinger, indtil en slutfortynding på 10 er opnået-4.

Endelig tages 100 μl fortyndingerne 10-2, 10-3 og 10-4 og hver fortynding er podet på MRS agar, fordelende ensartet med en Drigalski spatel.

Tælling af mælkesyrebakterier

I dette tilfælde udføres såningen med dybde.

For prøver af modermælk, tag 1 ml og læg den i et sterilt konisk plastrør. MRS agar tilsættes ved en temperatur på ca. 40 ° C op til et slutvolumen på 25 ml, hvilket giver en homogen blanding. Derefter hældes den i sterile petriskåle på en ensartet måde og får lov til at stå, indtil den polymeriserer..

Fortyndinger fremstilles til afføringprøver, som beskrevet ovenfor. Tag 1 ml af hver fortynding og anbring i sterile koniske plastrør. Smeltet MRS agar tilsættes til et volumen på 25 ml.

Blandingen af ​​hver fortynding hældes ensartet i sterile petriskåle. Lad det endelig stå indtil dets polymerisering.

På forskningsniveau

Hver dag bliver undersøgelsen af ​​mælkesyrebakterier mere interessant; specielt forskere søger at kende nye stammer og deres potentiale som initiering af fermenter til standardisering i fremstilling af mejeriprodukter, blandt andre anvendelser.

I denne forstand har Alvarado et al. (2007) anvendte M.R.S. agar. at gennemføre en undersøgelse, hvor de isolerede, identificerede og karakteriserede mælkesyrebakterier, der var til stede i en artisanrøget venezuelansk ost.

I ost fandt de tilstedeværelsen af ​​bakterier af slægterne Lactococcus og Lactobacillus, og konkluderede, at isolaterne blandinger er egnede som syrevækkerstammer i fremstillingen af ​​ost af pasteuriseret mælk.

På den anden side har Sánchez et al. (2017) anvendte M.R.S agar. at undersøge tilstedeværelsen af ​​mælkesyrebakterier i fordøjelseskanalen hos grise med henblik på at anvende dem som indfødte probiotika, der øger produktiviteten hos raske grise.

Med dette medium lykkedes det at isolere fire arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae og Pediococcus pentosaceus.

Ligeledes Báez et al. (2019) anvendte M.R.S. agar. at evaluere mælkesyrebakterier (BAL) og bifidobakterier med probiotisk potentiale i modermælk og afføring af spædbørn.

De formåede at isolere 11 BAL og 3 Bifidobacteria sp i modermælk og 8 BAL og 2 Bifidobacteria sp. i afføring Alle mødte visse parametre, der akkrediterer dem som bakterier med probiotisk aktivitet.

Forfatterne konkluderede, at både modermælk og afføring af udelukkende ammende spædbørn tjener som naturlige kilder til probiotiske bakterier.

Kvalitetskontrol

At evaluere kvaliteten af ​​M.R.S. kontrolstammer kan anvendes som:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli og Bacillus cereus.

De forventede resultater er tilfredsstillende vækst for de første 6 bakterier, mens E. coli og Bacillus cereus skal hæmmes i sin helhed.

referencer

  1. Alvarado C, Chacon Z, Otoniel J, Guerrero B, Lopez G. Isolering, identifikation og karakterisering af mælkesyrebakterier af en ost venezuelanske Artisan røget Andino. Dens anvendelse som Starter Dyrkning. Kelig. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Tilgængelig på: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolering af melkesyrebakterier fra pigmentens fordøjelseskanalen. Rev. undersøgelse. dyrlæge. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Tilgængelig på: scielo.org.
  3. Baez E, González G, Hernandez G, Lopez E, Mega M. Evaluering af mælkesyrebakterier og Bifidobacteria med probiotisk potentiale i modermælk og spædbarn afføring i byen Acevedo, Miranda 2017. Degree arbejde for graden af ​​kandidater bioassays. University of Carabobo, Venezuela.
  4. British Laboratory M.R.S agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  5. Wikipedia bidragsydere. MRS agar Wikipedia, den frie encyklopædi. 10. januar 2018, 19:44 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org Åbnet 17 februar 2019.
  6. Roy D. Media til isolering og opregning af bifidobakterier i mejeriprodukter. Int J Food Microbiol, 200.128; 69 (3): 167-82.