MacConkey Agar Foundation, forberedelse og brug

den MacConkey agar Det er et solidt kulturmedium, der tillader den eksklusive isolering af gramnegative baciller. Af denne grund er det et selektivt medium og tillader også at skelne mellem fermenterende og ikke-fermenterende baciller af lactose, hvilket gør det til et differentielt medium. Det er et af de mest anvendte kulturmedier i et mikrobiologisk laboratorium.

Dette medium anvendes primært til isolering af Gram-negative baciller, der tilhører familien Enterobacteriaceae, herunder opportunistiske og enteropatogene arter.

Det kan også bruges til at isolere andre enteriske baciller, der befinder sig i mave-tarmkanalen, men hører ikke til Enterobacteriaceae, som Aeromonas sp, Plesiomonas sp, blandt andre.

Endelig kan det isolere andre gram-negative, ikke-fermenterende glucosebaciller, der findes i miljøet, vand eller jordbund, men som undertiden kan være opportunistiske patogener som f.eks. Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alkaline sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, blandt andre.

indeks

• 1 Foundation
  • 1.1 MacConkey Agar
• 2 Fremstilling
• 3 Anvendelser af konventionel MacConkey agar
• 4 Andre varianter af MacConkey agar
  • 4.1 MacConkey agar med sorbitol
  • 4.2 MacConkey Agar uden krystalviolet eller salt
  • 4.3 MacConkey agar med cefoperazon
  • 4.4 MacConkey Agar fremstillet med 10% havvand v / v
• 5 referencer

fundament

MacConkey Agar

Grundlaget for dette medium kan forklares gennem beskrivelsen af ​​dets komponenter, fordi hver enkelt har et formål, der bestemmer en egenskab af det.

Galdesalte og violet krystal

På denne måde har MacConkey agar en kompleks sammensætning. Først og fremmest indeholder det galdesalte og violet krystal.

Disse elementer er ansvarlige for at hæmme væksten af ​​gram-positive bakterier og nogle krævende gramnegative baciller. Til gengæld favoriserer den udviklingen af ​​gramnegative baciller, der ikke påvirkes af disse stoffer. Derfor er det et selektivt medium.

Det siges at være en smule selektiv i forhold til andre medier, som også hæmmer væksten af ​​gram-positive bakterier og også af de fleste gramnegative bakterier.

Det er ekstremt selektivt for et bestemt slægt, såsom TCBS agar til isolering af Vibrio cholerae og andre lignende halofile og alkalofile arter.

Peptoner, polypektoner og lactose

Indeholder stoffer, der giver de nødvendige næringsstoffer til de mikroorganismer, der udvikler sig i dette medium, såsom peptoner, polypectoner og lactose.

Lactose er det vigtigste punkt for mediet at være et differentielt medium, fordi mikroorganismer, der har evnen til at fermentere lactose, vil udvikle stærke lyserøde kolonier.

Nogle bakterier kan gær laktose langsomt eller svagt, udvikle blege rosa kolonier og forblive positiv lactose.

De, der ikke fermenterer laktose, bruger peptoner som en energikilde, der producerer ammoniak, der alkaliserer mediet. Derfor er kolonierne, der stammer fra, farveløse eller gennemsigtige.

PH indikator

Farveændringen opnås gennem en anden vigtig forbindelse, der har MacConkey agar. Denne forbindelse er pH-indikatoren, som i dette tilfælde er neutral rød.

Gæringen af ​​lactose frembringer produktionen af ​​blandede syrer. De syrer mediet ved en pH under 6,8..

Dette medfører, at pH-indikatoren vender mod en intens rosa nuance. Farvens intensitet kan variere afhængigt af den endelige pH.

Destilleret vand, natriumchlorid og agar

På den anden side indeholder det destilleret vand og natriumchlorid, der giver hydrering og osmotisk ligevægt til mediet. Endelig indeholder mediet agar, hvilket er basen, der giver konsistensen af ​​fast medium.

Det fremstillede MacConkey agarmedium skal have en endelig pH justeret til 7,1 ± 0,2..

forberedelse

For en liter MacConkey-agar skal 50 g af det dehydratiserede medium vejes, derefter anbringes i en fiola og opløses i en liter destilleret vand. Efter 10 minutters hvile opvarmes den ved konstant blanding indtil den koger i 1 minut.

Derefter placeres fiola i autoklaven og steriliseres ved 121 ° C i 20 minutter. Det afsluttet tid, fjernet fra autoklaven og fik lov at afkøle til en temperatur på 45 ° C, for efterfølgende at tjene i sterile petriskåle i en laminær strømning eller mod Bunsen.

Tillad at størkne og opbevare i en pladeholder, der er omvendt og køle ved 2-8 ° C indtil brug.

For at opnå en MacConkey-agar, der hæmmer den svingende virkning produceret af Proteus-slægten, anvendes en lav-salt MacConkey-agar..

Anvendelse af konventionel MacConkey agar

MacConkey agar er inkluderet i alle sæt kulturmedier arrangeret til såning af kliniske prøver, der er modtaget i laboratoriet. Det er også nyttigt i fødevaremikrobiologi og miljømikrobiologi.

Variationen af ​​Gram-negative baciller, der vokser i dette medium, udtrykker fænotypiske egenskaber, som hjælper en formodentlig diagnose af de pågældende arter. For eksempel er koloniernes størrelse, farve, konsistens og lugt nogle af de egenskaber, der kan lede.

I dette miljø, arter af Escherichia coli, Klebsiella sp og Enterobacter sp producerer stærke lyserøde kolonier, omgivet af et område af udfældet galde.

I så meget bakterier som Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp og Hafnia sp de kan vises uden farve efter 24 timer eller lyseblå i 24 -48 timer.

Ligeledes producerer slægten Proteus, Edwadsiella, Salmonella og Shigella farveløse eller transparente kolonier.

Andre varianter af MacConkey agar

Der er andre varianter af MacConkey agar, der har specifikke formål. Næste er de nævnt:

MacConkey agar med sorbitol

Dette medium blev designet til at skelne den enteropatogene stamme (Escherichia coli enterohemorragisk O157: H7) af resten af ​​stammerne af Escherichia coli.

Dette medium ændrer kulhydratlaktosen til sorbitol. Stammerne af E. coli enterohaemorragisk O157: H7 adskiller sig fra resten fordi de ikke fermenterer sorbitol, og der opnås derfor gennemsigtige kolonier, men resten af ​​stammerne E. coli hvis de gærer sorbitol og kolonierne er stærke pink.

MacConkey Agar uden krystal violet eller salt

Denne agar adskiller sig meget fra klassisk MacConkey agar, da den ikke har krystalviolet, kan Gram-positive bakterier vokse.

På den anden side hæmmer fraværet af salt udseendet af swarming på agar produceret af nogle enteriske baciller, såsom dem af slægten Proteus, og således lette isoleringen af ​​alle tilstede bakterier, herunder Gram-positive bakterier.

MacConkey agar med cefoperazone

Denne variant af MacConkey agar blev designet til at indledningsvis isolere Laribacter hongkongensis og senere indså de, at det var nyttigt til isolering af Arcobacter butzleri. EnBegge er lidt buede negative Grambaciller resistente over for cefoperazon.

Disse bakterier er for nylig blevet forbundet som årsager til gastroenteritis og diarré erhvervet hos asiatiske og europæiske individer, der opstår som to potent nye patogener.

Den antibiotikum kan hæmme medfølgende flora i mavetarmkanalen, som fremmer udviklingen af ​​disse bakterier, forhindrer gå upåagtet hen, da de kræver 72 timer til at vokse.

MacConkey Agar tilberedt med 10% havvand v / v

Denne variant er nyttige til at evaluere sundhedsmæssige bakterielle indikatorer for fækal forurening, herunder coliforme bakterier og fækale coliforme bakterier i rekreativt saltvand (strande og bugter).

Cortez et al i 2013, viste, at den således fremstillede medium øger genopretning af disse mikroorganismer i saltholdige omgivelser, sammenlignet med anvendelsen af ​​MacConkey-agar fremstillet med destilleret vand.

Dette skyldes i det modificerede medium væksten af ​​bakterier, der er fysiologisk i en hviletilstand "levedygtige, men ikke-dyrkbar" stimulerede derfor kan ikke erstattes på konventionel.

referencer

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Anvendelse af cefoperazon MacConkey agar til selektiv isolering af Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. "MacConkey Agar." Wikipedia, Den frie encyklopædi. 4. april 2018, 18:16 UTC. 29 Dec 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L Valbuena O. Effekt af forberedt kulturmedier med havvand på sundhedsindikatorer i havvand kurbade Chichiriviche, Falcon State, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.