Næringsrige agarfundament, forberedelse og anvendelse



den nærende agar det er et ikke-selektivt og ikke-differentielt fastkulturmedium. I dette miljø vokser alle slags bakterier ikke fra næringsmæssigt synspunkt.

Det er et simpelt middel og til trods for dets navn indeholder en lavere næringsværdi sammenlignet med andre lignende medier, såsom hjerneinfusion agar eller trypticase soja agar.

Dens anvendelighed i laboratoriet er meget varieret. Hovedsagelig anvendt til subkultur af arter, vedligeholdelse af stammer, tælling af kolonier, som grundlag for fremstilling af blodagar, blandt andre.

Også dens lys beige skelnes usædvanlig pigment produktion som følge af nogle bakterie-, stammer såsom det grønt pigment Pseudomonas aeruginosa, det murstenrøde pigment produceret af Serratia marcescens ved stuetemperatur, det gyldne gule pigment af Staphylococcus aureus, blandt andre.

Derudover er det et af de mest økonomisk voksende medier, der findes på markedet.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Sammensætning
  • 3 Fremstilling
  • 4 anvendelser
    • 4.1 Som grundlag for fremstilling af blodagar
    • 4.2 Stimulere sporuleringen af ​​spordannende bakterier
    • 4.3 Vedligeholdelse af stammen
    • 4.4 Koloni tælling
    • 4.5 Gennemførelse af diagnostiske test
    • 4.6 Genopretning af mesofil aerob rekreativt saltvand (Strande)
  • 5 referencer

fundament

Som allerede nævnt ovenfor, er det en meget simple midler, som er baseret på at levere næringsstoffer for bakteriel vækst ubegrænset komplekse reaktioner uden at fortolke.

Da mediet er gennemskinneligt, er det ideelt til at tælle kolonier ved metoden til såning ved dybden.

sammensætning

Den består hovedsageligt af kødekstrakt eller gærkstrakt, peptoner eller pancreatisk gelatinefordøjning, agar-agar, natriumchlorid og destilleret vand.

Uddraget af kød eller gær og peptoner repræsenterer kilderne til kulstof og essentielle mineraler (nitrogen, fosfor og svovl), som vil blive brugt af bakterier som energikilde og vækstfaktorer.

På samme måde er agar-agar grundlaget for alle faste vækstmedier, der erstatter gelatine, som var den første baseforbindelse, der blev anvendt af Robert Koch for at give sin mediefaste konsistens..

Agar er et polysaccharid sammensat af galactose, galactomannan, agarose og agaropectin. Den sættes ved 40 ° C og smelter tæt på 100 ° C.

For sin del giver natriumchlorid mediet den osmolaritet, der er nødvendig for bakteriel udvikling.

Endelig tjener vandet til at hydrere og opløse de lyofiliserede forbindelser. Destilleret vand justeret til neutral pH bør anvendes. Kranvand bør ikke anvendes, fordi det indeholder calcium og magnesium, der kan reagere med fosfaterne i mediet og danne uopløselige salte.

forberedelse

For en liter nærings agar skal 31 g af det dehydratiserede medium vejes. Den er anbragt i en fiola og opløst i en liter destilleret vand. Efter 5 minutters hvile opvarmes over en varmekilde og blandes konstant, indtil den koger i 1 eller 2 minutter.

Derefter placeres fiola i en autoklav og steriliseres ved 121 ° C i 20 minutter.

I slutningen af ​​tiden fjernes den fra autoklaven og serveres i sterile petriskåle ved hjælp af en laminær flowhætte eller Bunsen-brænderen..

Hvis petriskålene er disponible (plastik), skal mediet fordeles, når agaren har en temperatur på ca. 50 ° C for at forhindre, at de deformeres ved for høj varme.

Tillad at størkne og opbevare i en pladeholder, der er omvendt og køle ved 2-8 ° C indtil brug.

Pladerne skal hærdes, før de bliver sådd. Nærende agarplader bør ikke anvendes, hvis de er forurenet eller dehydreret.

PH af det fremstillede medium bør indstilles til 7,3 ± 0,2.

applikationer

Det er det enkleste kulturmedium, der anvendes i mikrobiologilaboratoriet. Dens formulering er fremragende til væksten af ​​ikke-krævende bakterier.

Dets vigtigste anvendelser forklares nedenfor:

Som base for fremstilling af blodagar

Dette medium anvendes nogle gange som en base til fremstilling af blodagar, men det er ikke den mest anvendte base.

Stimulere sporuleringen af ​​spordannende bakterier

Dette dyrkningsmedium er især nyttigt til stimulering af sporuleringen af ​​spordannende bakterier, såsom Bacillus sp.

For at gøre dette såes en stamme af slægten Bacillus og inkuberes i 24 timer ved 37 ° C i aerobiose. Når kolonierne er vokset, bliver pladen udsat for en spænding ved temperatur, det vil sige, at ovnenes temperatur øges til 44 ° C og forlades i 24 timer mere eller det indføres i køleskab i 24 timer.

Ved afslutningen af ​​afgrøden forlænges kulturerne og farves med Gram stain eller Shaeffer-Fulton spore plet. I dem vil bacillerne med endosporer (sporer inde i bacillus) og eksosporer (sporer uden for bacillus) blive observeret..

Vedligeholdelse af stamme

Nogle forskningslaboratorier eller universitetsundervisningsstøttelaboratorier skal opretholde levedygtige klinisk vigtige bakterier så længe som muligt for at kunne anvende bakteriebanken (bacteriotheca) til forskningsarbejde eller til forberedelse af undervisningspraksis. Studerende vil lære at manipulere og identificere disse mikroorganismer.

Den nærende agar, såvel som hjerneinfusion agar, kan anvendes til dette formål. Agaren fremstilles, hældes i bakelit-afskårne rør og vippes på en bund, således at agar størkner danner en blok i bunden og en skråning på overfladen (fløjtestop).

Hvert rør mærkes ved at placere navnet på de bakterier, der skal plantes, og datoen. På bekkenet vil hver af bakterierne blive plantet og inkuberet i 24 timer, når kolonierne dyrkes, bliver rørene opbevaret ved stuetemperatur.

Bakterioteca skal fornyes fra 1 til 3 måneder for at undgå forurening og dehydrering af mediet og såvel som død af bakterier.

Kun ikke-krævende bakterier kan opretholdes på denne måde.

Koloni tæller

Selv om der er specialiserede midler til tælling af kolonier, såsom standardtællingsagar, kan nærings agar anvendes til dette formål enten ved at så på overfladen med en drigalskispatel eller ved dybde. Derfor er det meget nyttigt i den mikrobiologiske analyse af mad og vand.

Udførelse af diagnostiske tests

Fordi det er et medie, der ikke indeholder blod, eller andre tilsætningsstoffer, er det ideelt til kolonier dyrket i dette medium til test katalase.

På samme måde er det på grund af dets klare farve indikeret at udføre oxidasetest direkte på et område af det podede agar uden indblanding.

Genopretning af mesofil aerob rekreativt saltvand (strande)

Næringsstofagar fremstillet med 10% havvand er nyttig til evaluering af mesofile aerober i strandvand.

På den måde kan vi sætte pris på det niveau af reel forurening, som farvandet har med disse mikroorganismer, da i denne type prøver overlappes resultaterne, når der anvendes konventionelle medier.

Dette blev påvist af Cortez et al. i 2013 i et forskningspapir.

Dette er eksplicit på grund af den pludselige ændring, som bakterierne gennemgår, når de går fra et hyper-saltvandsmiljø til et lavt saltmiljø, derfor kommer mikroorganismerne i en tilstand af sløvhed, hvor de er levedygtige, men ikke dyrkbare.

referencer

  1. "Nærende agar." Wikipedia, Den frie encyklopædi. 13. september 2016, 20:33 UTC. 29 dec 2018, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L Valbuena O. Effekt af forberedt kulturmedier med havvand på sundhedsindikatorer i havvand kurbade Chichiriviche, Falcon State, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Vægge V, Dias V, Silva Cardoso de Almeida M og M. Mikrobiologisk vandkvalitet for Dose Inseminantes for Svin.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.