Papa dextrose fundament, forberedelse og brug



den papa dextrose agar det er et solidt, ikke-selektivt nærende kulturmedium. Det kan vokse bakterielle og svampe arter, men dets anvendelse er angivet specielt til isolering af filamentøse svampe og gær. Det er også kendt som et PDA medium ved den engelske udtryk Potato Dextrose Agar.

Det er især nyttigt til isolering af fytopatogene svampe, det vil sige dem, der påvirker planter. For at plante prøverne fra inficerede planter kan andre medier såsom Sabouraud agar eller malta agar anvendes, men til rutinemæssig brug foretrækkes kartoffel dextrose agar på grund af større sporulation..

Det bruges også til tælling af svampekolonier i prøver af kosmetik, lægemidler og nogle mejeriprodukter. Ligeledes er det fordelagtigt at plante prøver af hudskrabninger på jagt efter dermatofytter, som vokser meget godt i dette medium og udvikler deres karakteristiske pigmenter.

Kartoffeldextrose-mediet er meget simpelt og let at forberede i laboratoriet. Den indeholder, som navnet antyder, kartoffelinfusion, dextrose og agar-agar. Derudover kan hæmmende stoffer tilsættes for at forhindre bakteriel vækst og forøge selektiviteten for svampearter.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 - Hjemmelavet (ikke-kommercielt) fremstilling af papa dextrose agar
    • 2.2 - Kommerciel fremstilling af papa dextrose agar
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Proces til plantning af planteprøver på kartoffel dextrose agar
    • 3.2 Proces til plantning af prøver af hud-, hår- eller neglevægt på papa dextrose agar
    • 3.3 Identifikationsprocedure
    • 3,4 koloniantal
    • 3.5 Vedligeholdelse af svampestammer
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 referencer

fundament

Papa dextrose agar er et dyrkningsmedium, der giver de nødvendige ernæringsmæssige elementer til udvikling af filamentøse svampe og gær.

Kombinationen af ​​kartoffelinfusion med glucose giver den perfekte energikilde til en tilfredsstillende vækst i svampe. Mens agar er den der giver konsistens til miljøet.

Mediet alene hæmmer ikke væksten af ​​bakterier, så det er et ikke-selektivt medium. For at gøre det selektivt har du brug for tilsætning af hæmmende stoffer som vinsyre eller antibiotika.

forberedelse

-Hjemmelavet (ikke-kommercielt) fremstilling af kartoffel dextrose agar

Petriskål

Den er forberedt på følgende måde:

Først og fremmest vaskes kartoflerne meget godt og fjerner snavsene de har. De er skåret i tynde skiver med alt og skal. 200 g kartofler vejes og anbringes til kogning i en liter destilleret vand i en halv time.

Efter tiden filtreres eller spændes hele præparatet gennem en gasbind.

Den opnåede væske fuldendes med destilleret vand, indtil det når en liter. Til infusionen tilsættes 20 g agar-agar og 20 g dextrose, blandes godt og autoklaveres ved 121 ° C ved 15 pund tryk i 15 minutter.

Lad afkøle til 50 ° C og server i sterile petriskåle. Forberedte plader opbevares i køleskab.

klodser

Du kan også forberede papa dextrose agar kiler.

I dette tilfælde placeres 12 til 15 ml medium i steriliseringen i autoklaven i rør, hvorefter de autoklaveres, og efter aflæsning ligger de på specielle understøtninger, indtil de størknes. Gem i køleskabet.

Mediet forbliver ved en pH på 5,6 ± 0,2, dog tilføjer nogle laboratorier 10% vinsyre for at sænke pH til 3,1 ± 0,1 for at hæmme bakterievækst.

På samme måde foretrækker andre laboratorier at tilføje antibiotika for at gøre det selektivt til dyrkning af svampe og forhindre bakteriel udvikling.

-Kommerciel forberedelse af kartoffel dextrose agar

Vejer 39 g af det kommercielt tilgængelige dehydrerede medium og opløses i en liter destilleret vand. Lad i hvile i 5 minutter.

Blandingen opvarmes ved omrøring ofte indtil dens totale opløsning. Efterfølgende steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Plader eller kiler kan fremstilles. Fortsæt som beskrevet ovenfor.

PH forbliver ved 5,6 ± 0,2. Hvis pH 3,1 ønskes, tilsættes 14 ml 20% steril vinsyre, før der serveres på pladerne..

Farven på det uforberedte medium er beige og tilberedt er lys rav med et let overskyet eller opaliserende udseende.

applikationer

Fremgangsmåde til plantning af planteprøver i kartoffel dextrose agar

-Til blade med pletter

Bladene skæres i stykker.

I et 50cc glas med 50% alkohol skal du placere stykkerne af bladene (stykker farvede og sunde) for at desinficere overfladen i 20 til 30 sekunder. Træk alkoholen og tilsæt 20% natriumhypochlorit i 40 til 50 sekunder, hvis de er tynde blade og øge tiden til 80 sekunder, hvis det er bark og logs.

Træk natriumhypochloritten og tag det desinficerede stykke med et sterilt klip og læg dem på overfladen af ​​mediet (maks. 10 stk.). Anbring datoen og inkubér fra 20 til 30 ° C.

-Til frugt og knolde

Hvis frugten er kødfulde, skal du åbne frugten, der er berørt af svampen og tage stykker med en steril skalpel, både den syge del og den sunde del og læg den på overfladen af ​​agar.

Hvis frugten er citrus, som en citron eller en appelsin, skal du åbne og så dine frø.

Når overfladen af ​​frugten er påvirket og sporer observeres, er det bedst at anvende den revet metode på pladen; det drejer sig om at røre sporerne med en spatel i form af "L" steriliseret og afkølet, og udfør derefter en zigzag såning 2 til 3 gange på agar.

-Til korn

De desinficeres som beskrevet i bladene og anbringes derefter på agar.

-Til grene og stilke

En skrabning af barken udføres, og så bliver stykker af den sunde og syge del taget og sået direkte på agaret..

De såede plader inkuberes i aerobiosis ved 20-30 ° C i 72 timer.

Fremgangsmåde til plantning af prøver af hud-, hår- eller neglevægt på papa dextrose agar

Prøven skal tages ved hjælp af et skalpelsblad nr. 11, enten for at skære berørt hår, hudflager eller negle på jagt efter dermatofytter. Før prøven tages, desinficeres området med 70% alkohol.

-Hudprøve

I skællede læsioner skal skadelens kant skrabes, da der er større sandsynlighed for at finde svampen.

I eksudative læsioner tages prøven med tør eller våd vatpind. Så straks på kartoffel dextrose agar eller Sabouraud agar. Undgå transportmidler.

En anden metode til prøveudtagning er gennem tæppet firkantet teknik Mariat og Adan Campos. I dette tilfælde gnides det berørte område 5 gange med et stykke sterilt uld til videre dyrkning.

Prøven kan placeres direkte i dyrkningsmediet.

-Hårprøve

Afhængigt af patologien kan den berørte del blive afskåret eller revet af rødderne. Placer prøven i dyrkningsmediet.

-Fingernailprøve

Du kan skrabe eller skære en bestemt del af den ramte negle. Det afhænger af den type skade.

Klip prøven i 1 mm stykker inden såning for at øge sandsynligheden for kontakt med svampen med dyrkningsmediet.

Identifikationsprocedure

Kolonierne opnået i pladen isoleres i rør indeholdende kartoffel dextrose agar for at udføre koloniernes makroskopiske undersøgelse (udseende, farve, konsistens, udviklingsgrad)..

Den mikroskopiske undersøgelse (observation af strukturer og deres formationer) kan ske ved mikrokulturer eller direkte observation under mikroskopet mellem lamina og lamella.

Koloniantal

Dette medium kan også bruges til at bestemme belastningen af ​​svampe og gær til stede i planteprøver, fødevarer, kosmetik eller medicin. Til dette formål anvendes papa dextrose agar suppleret med antibiotika, såsom: (chloramphenicol, chlorotetracyclin eller begge dele).

Hæld 1 ml af prøven - fortrinsvis fortyndet - i en steril og tom petriskål, smelter derefter en kartoffel dextrose agarplug og afkøles til 45 ° C. Hæld over petriskålen og drej til homogeniseret. Lad det stå i ro indtil det størkner.

Inkuber i aerobiosis ved 20-25 ° C (forme) eller ved 30-32 ° C (gær) i 5 til 7 dage eller mere afhængigt af hvilken type svamp der søges, og typen af ​​prøve. To plader kan bruges til at inkubere i begge temperaturområder.

Vedligeholdelse af svampestammer

Papa dextrose agar kan bruges til at opretholde levedygtige svampestammer i flere år.

For at gøre dette dyrkes svampen i papa dextrose agar kiler, og når svampen er vokset, er den dækket af mineralolie. Olien skal steriliseres i en autoklav i 45 minutter og have en omtrentlig viskositet på 300 til 330 Saybolt. Olien skal overstige skråtipset med 1 til 2 cm.

Kvalitetskontrol

Fra hver forberedt sats skal en eller to plader tages og inkuberes ved 25 ° C i 48 timer eller ved 20 ° C i 96 timer. En god sterilitetskontrol er en, hvor der ikke er nogen udvikling af kolonier.

Også kendte eller certificerede kontrolstammer som:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. I alle tilfælde forventes god vækst.

referencer

  1. Laboratorier Britania. Papa glucosado agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories Kartoffel dextrose agar. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
  3. Insumolab Laboratorium Kartoffel dextrose agar. Tilgængelig på: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. General Mycology. 1994. 2. udgave Universidad Central de Venezuela, Bibliotek udgaver. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Evaluering af mikrobiologisk kvalitet i øjenskygge, kompakt pulvertype af et nationalt produktionslaboratorium ifølge Pharmacopeia Usp Reference Method 2005. Speciale for at kvalificere sig til titlen farmaceutisk kemiker. Universitetet i San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Behandling af overfladeprøver. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; pp. 1-12