Agarsalt og manitolfundament, forberedelse og anvendelse



den salt agar og mannitol eller salt mannitol er et fast, selektivt og differentielt dyrkningsmedium. Det blev skabt af Chapman for isolering af patogene Gram positive cocci, især Staphylococcus aureus.

Det er dog også nyttigt at isolere Staphylococcus epidermidis, det kan nogle gange være til stede som et opportunistisk patogen, og Staphylococcus saprophyticus, anerkendt urinpatogen, blandt andre arter.

Nogle Enterococcus er i stand til at vokse i dette medium, såvel som visse Gram positive spore-dannende baciller.

Dette medium er meget nyttigt i analysen af ​​kliniske prøver, men det bruges også i mikrobiologisk undersøgelse af fødevarer og i kvalitetskontrol af industriprodukter, såsom kosmetik, medicin, blandt andre..

Saltet mannitolagar består af ekstrakter og peptoner af oksekød, triptein, mannitol, natriumchlorid, phenolrød og agar.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
  • 3 anvendelser
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Endelige overvejelser
  • 6 referencer

fundament

Mannitol agar er selektiv takket være den høje koncentration af salt, den har. Saltholdighed virker som et hæmmende stof og forhindrer væksten af ​​gramnegative bakterier.

Det er også differentieret på grund af tilstedeværelsen af ​​mannitolcarbohydrat og fenol-rødt pH-indikatoren. Herfra producerer bakterierne, der er i stand til at fermentere mannitol, syrer, forsuring af mediet, omdrejning af kolonierne og mellemgulvet.

På den anden side vokser kolonier, der ikke fermenterer mannitol, i mediet, der tager næringsstoffer, der leveres af ekstrakterne og peptonerne af kød og tripteína. Derefter ekstraherer bakterierne kulstof, nitrogen, vitaminer og mineraler, der er nødvendige for deres vækst.

Kolonierne i dette tilfælde kan være svage eller stærke lyserøde, og mediet forbliver i samme farve eller ændrer sig til fuchsia.

Agar er det stof, der giver konsistensen til mediet.

forberedelse

For at fremstille en liter saltet mannitolagar, vejes 111 g af det dehydreret medium af det kommercielle hus af præference, og opløses i 1000 ml destilleret vand ved anvendelse af en fiola.

Varme påføres ved ofte at fjerne mediet for at forbedre opløsningsprocessen. Lad det koge i et øjeblik.

Placer violonen i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

I slutningen af ​​tiden fjernes fiolaen ud af autoklaven, får lov til at stå og serveres mellem 15 og 20 ml på sterile petriskåle, når temperaturen er ca. 50 til 55 ° C.

Det er tilladt at størkne, bestille i omvendt form i plaqueros og holde i køleskab indtil brug. Før du plantes en prøve, skal du vente på pladen at tage temperaturen på miljøet.

Pladerne bliver sået ved striation eller ved såning på overfladen med en drigalski spatel. Den endelige pH af det fremstillede medium bør være 7,4 ± 0,2

Farven på det dehydrerede medium er lys beige, og farven af ​​det fremstillede medium er orange rødt.

applikationer

På grund af dens høje selektivitet er dette medium ideelt til plantning af prøver med blandet flora, hvor man ønsker at se efter tilstedeværelsen af Staphylococcus aureus, som det vigtigste patogen i dette slægt.

I denne forstand er en af ​​dens hyppigst anvendte anvendelser i den mikrobiologiske analyse af prøver af pharyngeal exudates og nasal discharge, især for at detektere asymptomatiske bærere af S. aureus.

Nogle lande har implementeret denne analyse som et obligatorisk krav til folk, der ønsker at arbejde som fødevareleverandører.

Denne kontrol forhindrer ansættelse af personer, der er luftfartsselskaber S. aureus, således at man undgår massiv madforgiftning, på grund af forbruget af fødevarer forurenet med stafylokok enterotoxin.

Det kan også indgå i såning af sårinfektioner, blodkulturer, CSF, bronchoalveolær lavage, blandt andre..

Mannitolsaltagar er nyttig til urinkulturer genisoleret koloni fra CLED agar eller blodagar som har afsløret Gram grampositive kokker i klynger.

Det gælder også i mikrobiologisk analyse af mad, drikkevand, jordbund, blandt andre anvendelser.

Kvalitetskontrol

Når der først er fremstillet et parti plader med saltet mannitolagar, er det tilrådeligt at udføre en kvalitetskontrol. Kontrolstammer er sået for at vise, om der er vækst eller ej.

Som en positiv kontrol, kendte stammer af Staphylococcus aureus. Det skal vokse tilfredsstillende ved at udvikle gule kolonier, og mediet bliver også den samme farve.

Ligeledes er det hensigtsmæssigt at indbefatte en kendt stamme af Staphylococcus epidermidis. Det skal vokse tilfredsstillende ved at udvikle rosa kolonier, og mediet forbliver den samme farve eller mørkere i en stærkere pink.

Som en negativ kontrol anvendes stammer, som ikke bør vokse i dette medium. For eksempel kan du plante en kendt stamme af Escherichia coli eller Klebsiella pneumoniae. Det forventede resultat er fuldstændig hæmning, det vil sige ingen vækst.

Derudover bør en plade uden podning inkuberes. I den skal der ikke være nogen vækst, ingen farveændring.

Det er vigtigt, at pladen ikke anvendes, hvis der er tegn på forringelse, såsom forurening, dehydrering, misfarvning, blandt andre..

Endelige overvejelser

Når man bruger det saltede mannitolagarmedium, skal der tages højde for nogle vigtige aspekter:

-At opnå en vækst af gule kolonier indikerer ikke, at det er Staphylococcus aureus. Man må huske på, at nogle af Enterococcus stamme er i stand til at vokse i dette medium og fermentere mannitol såvel som visse Gram-positive sporeformende baciller..

Derfor er det vigtigt at udføre et gram til kolonien og en katalastest.

-På den anden side må det overvejes, at andre arter af Staphylococcus er forskellige fra aureus De er også i stand til at fermentere mannitol. Derfor er det vigtigt at sub-dyrke kolonien til en næringsstofbouillon for at tage derfra og udføre koagulastestesten.

Blandt Staphylococcus-arter af klinisk betydning for mennesket, der fermenterer mannitol, er: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, blandt andre.

Andre kan give en variabel reaktion, det vil sige nogle gange positive og nogle gange negative. Nogle er S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, blandt andre.

-Det anbefales ikke at tage kolonier direkte fra mannitolagar til udførelse af koagulasetesten, da mediumets høje saltkoncentration kan forstyrre resultatet.

-Endelig anbefales det at inkubere pladerne frøet med saltet mannitol i op til 48 timer på grund af at nogle stammer af S. aureus De kan langsomt male mannitolet, selvom det ikke er meget hyppigt.

referencer

  1. Laboratorier Britania. Mannitol salt agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  2. "Saltet Mannitol Agar". Wikipedia, Den frie encyklopædi. 31. oktober 2018, 19:08 UTC. Jan 17 2019, 20:55, tilgængelig på: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial
  5. BD Laboratories BD Mannitol Salt Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com.