Agar Salmonella-Shigella Foundation, forberedelse og anvendelse

den Salmonella-Shigella agar også kendt som SS agar, er et moderat selektivt og differentielt medium, der er specielt designet til isolering af enteropatogene bakterier fra slægten Salmonella og Shigella fra både miljømæssige og kliniske prøver..

SS agar har en kompleks sammensætning; Den består af kødekstrakt, pepton, lactose, galdesalte, natriumcitrat, natriumthiosulfat, ferriscitrat, agar, neutralt rødt, lysegrøn og destilleret vand. I betragtning af sin store selektivitet er det muligt at plante prøver med rigelig blandet flora.

I mikrobiologilaboratorierne anvendes Salmonella-Shigella-mediumet meget til at undersøge tilstedeværelsen af ​​Salmonella og Shigella i prøver af diarréafføring, spildevand, drikkevand og mad.

Nogle gange er det nødvendigt at anvende præ-berigelses bouillon (laktos bouillon) og berigelse (selenit cystin bouillon) for at genoprette Salmonella stammer.

Disse trin er nødvendige, når eksistensen af ​​Salmonella er mistænkt i meget lav mængde, eller hvor stammen kan blive mishandlet ved processer, der er typiske for industriel produktion, hovedsagelig forarbejdede fødevarer. Det er også tilrådeligt at berige afføringprøver fra patienter, der er blevet behandlet med antibiotika.

Efterfølgende kan den berigede bouillon podes på Salmonella-Shigella agar og andre lignende medier, såsom xyloseagar, deoxysiloxanlysin (XLD) og enterisk Hektoen-agar (HE).

indeks

• 1 Foundation
  • 1.1 Ernæringsmæssig kraft
  • 1.2 Sammenhæng
  • 1.3 Selektiv
  • 1.4 Differential
• 2 Fremstilling
• 3 Brug
• 4 begrænsninger
• 5 Kvalitetskontrol
• 6 referencer

fundament

Hver komponent af Salmonella-Shigella kulturmediet har en specifik funktion, og blandingen som helhed giver den egenskaber der karakteriserer den.

Nærende kraft

Kødekstraktet og peptonen (fordøjet kasein og animalsk væv) giver de nødvendige næringsstoffer (nitrogen, kulstof og vitaminer) til udvikling af mikroorganismer, der er i stand til at tolerere resten af ​​bestanddelene.

konsistens

Agar-agar er ansvarlig for at tilvejebringe solid konsistens til mediet.

selektiv

Dette medium er meget selektivt, fordi det indeholder galdesalte, natriumcitrat og lysegrøn. Derfor hæmmer det væksten af ​​alle gram-positive bakterier og de fleste af de gramnegative baciller, herunder nogle coliformer.

Mens bakterier af slægten Salmonella og nogle stammer af Shigella understøtter disse forbindelser.

Hovedsagelig er slægten Salmonella meget modstandsdygtig over for galdesalte, så meget, at de er i stand til at leve i galdeblæren hos nogle bærepatienter, som hele tiden uddriver bakterierne gennem fæces.

forskellen

Lactose er det fermenterbare kulhydrat, der hjælper med at differentiere laktosefermentestammerne fra de ikke-fermenterende stammer. Denne egenskab fremgår af tilstedeværelsen af ​​pH-indikatoren, som i dette medium er phenolrød.

Lactosefermentestammerne giver røde kolonier, medens de ikke-fermenterende stammer er farveløse. Denne egenskab er vigtig, da Salmonella og Shigella ikke fermenterer laktose.

På den anden side indeholder dette medium natriumthiosulfat som en kilde til svovl og ferriccitrat som en kilde til jern. Begge forbindelser er i stand til at differentiere bakterierne, der er i stand til at producere hydrogensulfid. Disse reagerer til dannelse af et sort bundfald af uopløseligt og synligt ferrisulfid.

Denne ejendom har nogle stammer af slægten Salmonella. Normalt er deres kolonier farveløse flade med en sort prik i midten af ​​den. Resten af ​​salmonellerne producerer ikke H₂S og udvikle sig som farveløse kolonier.

På den anden side er kolonier af slægten Shigella farveløse fladt uden mørkning.

forberedelse

Dette betyder, at det er meget nemt at forberede.

Afvej 63 g af det dehydrerede kommercielle medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Opvarm opløsningen og omrør. Blandingen kan koge i op til minutter.

Dette medium bør ikke autoklavere. Efter opløsningen serveres den direkte på enkelt- eller dobbelt sterile plader.

Når de størkner, arrangeres de på en omvendt måde i plaque beslutningstagere og opbevares i køleskab (2-8 ° C), indtil de anvendes.

Mediet efter tilberedning skal være pH 7,2 ± 0,2 og orange rødt.

Det er vigtigt at lade pladerne hærdes, før prøverne såes. Du kan direkte frøer den oprindelige prøve, aflader materiale på en del af agar og derefter derfra striber ved udmattelse.

I tilfælde af brug af berigede bouillon, passere en del af selenit bouillon og så med drigalski spatel.

Inkuber ved 37 ° C i 24 timer i aerobiosis.

Husk at mængden af ​​gram der skal vejes og den endelige pH i mediet kan variere fra et kommercielt hus til et andet. Mediernes basisplade bringer altid indikationerne for dets forberedelse.

brug

Det bruges ofte til analyse af afføringskulturer og i mikrobiologisk undersøgelse af resterende vandprøver, drikkevand og mad.

Ofte fremstilles dobbeltplader, på den ene side er Salmonella-Shigella-agar anbragt og på den anden side XLD-agar.

begrænsninger

-Nogle stammer af Shigella vokser ikke i dette medium. Derfor anbefales det ikke til primær isolering af slægten.

-Ikke alle klare kolonier med et sort center er indicative for Salmonella; biokemiske test skal udføres for at opnå en korrekt identifikation, da kolonierne af nogle Proteus-stammer ikke kan skelnes fra Salmonella-stammerne.

-Det dehydrerede medium skal være forsigtigt med miljøpåvirkning, da det er meget hygroskopisk. Derfor skal det opbevares i et tørt og godt lukket miljø. Åbn i meget korte perioder.

-Over tid kan galdesaltene i mediet udfælde, hvilket danner et billede, der ligner en matet i agaret, men dette påvirker ikke resultaterne.

-Nogle stammer af Shigella kan langsomt fermentere lactose.

Kvalitetskontrol

For at bevise at mediet fungerer korrekt, er det tilrådeligt at plante kendte eller certificerede kontrolstammer og observere, om væksten opfylder de forventede egenskaber.

Til dette formål, stammer af E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis.

De forventede resultater er:

Escherichia coli --lyserøde konvekse kolonier.

Enterobacter og Klebsiella- store kolonier og rød eller lyserød mucoid.

Shigella flexneri --klare eller farveløse flade kolonier.

Salmonella typhimurium - farveløse kolonier med sort center.

Enterococcus faecalis-- total inhibering.

referencer

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2009. Tilgængelig på: f-soria.es
2. BD Laboratory. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com
3. Laboratorier Britania. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
4. Valtek diagnostik. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar) .2010. Tilgængelig på: andinamedica.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave. Editorial Panamericana S.A. Argentina.