Agarblodfundament, anvendelse og forberedelse

den blod agar det er et beriget fast medium, differentieret men ikke selektivt. Det bruges til genopretning og vækst af et stort udvalg af mikroorganismer fra kliniske prøver eller subkulturer.

Klassisk blodagar bør indgå i såning af de fleste kliniske prøver, der er modtaget i laboratoriet; bortset fra afføring prøver hvor det ikke er nyttigt, medmindre forberedt med visse ændringer.

Dette dyrkningsmedium er grundlæggende sammensat af en beriget baseagar og 5% blod. Basen af ​​agar kan variere alt efter behovene, men består hovedsagelig af peptoner, aminosyrer, vitaminer, kødekstrakt, natriumchlorid, agar, blandt andre.

Hvad angår blod, er det normalt nødvendigt at have kontakt med et bioterium for at opnå blod fra dyr, såsom får, kanin eller hest. Dette er dog ikke altid muligt, og til tider anvendes menneskeligt blod.

Blod agarmediet kan fremstilles i laboratoriet eller kan købes klar til virksomheder, der er dedikeret til det. Forberedelsen af ​​dette medium er en af ​​de mest følsomme, enhver uforsigtighed i dens forberedelse vil resultere i et forurenet parti.

Derfor skal alle mulige forholdsregler træffes, og i sidste ende skal der foretages en kvalitetskontrol ved 37 ° C 1 plade for hver 100, der fremstilles.

indeks

• 1 Foundation
• 2 anvendelser
  • 2.1 Valg af blodtype
  • 2.2 Valg af base agar type
  • 2.3 Anvendelse af blodagar i overensstemmelse med basismediet anvendt til dets fremstilling
• 3 Fremstilling
  • 3.1 Vejning og opløsning
  • 3,2 sterilisere
  • 3.3 Aggregering af blod
  • 3.4 Hæld i petriskålene
• 4 referencer

fundament

Det er allerede blevet nævnt, at blodagar har karakteristika for at være et beriget, differentielt og ikke-selektivt medium. Kælderen af ​​hver af disse egenskaber forklares nedenfor.

Blodagar er et beriget medium, fordi det som hovedadditiv har 5-10% blod på en agarbase. Begge forbindelser indeholder mange næringsstoffer, og denne egenskab tillader de fleste dyrkelige bakterier at vokse i den.

Denne vækst sker uden begrænsning; Af denne grund er det ikke-selektivt. Men hvis forbindelser tilsættes til dette medium, der forhindrer væksten af ​​nogle mikroorganismer og favoriserer andres vækst, bliver det selektivt. Dette er tilfældet, hvis visse former for antibiotika eller antifungale stoffer tilsættes.

Ligeledes er blodagar et differentieret medium, da det gør det muligt at skelne mellem 3 typer bakterier: beta-hæmolytisk, alfa-hemolytisk og gamma-hæmolytisk..

Beta-hæmolytiske er sådanne med evnen til at lysere eller bryde helt røde blodlegemer og danner en klar halo omkring kolonierne, således producere hæmolyse eller ß ß -hemólisis og mikroorganismer kaldes beta-hæmolytiske.

Eksempler på ß-hæmolytiske bakterier er Streptococcus pyogenes og Streptococcus agalactiae.

Alfa-hæmolytika er dem, der udfører en delvis hæmolyse, hvor hæmoglobinet oxideres til methemoglobin, hvilket frembringer en grønlig farve omkring kolonierne. Dette fænomen er kendt som hæmolyse a eller a-hemolyse, og bakterierne klassificeres som a-hæmolytiske.

Eksempel på a-hæmolytiske bakterier er Streptococcus pneumoniae og Streptococcus af gruppen viridans.

Endelig er der bakterier kaldet gamma-hemolytisk eller ikke-hæmolytisk. Disse vokser på agar uden at skabe ændringer på det, en effekt kendt som y-hemolyse, og mikroorganismerne er y-hemolytiske.

Eksempel på y-hemolytiske bakterier: nogle stammer af Streptococcus fra gruppe D (Streptococcus bovis og Enterococcus faecalis).

applikationer

Blodagararkulturmediet er et af de mest almindeligt anvendte i mikrobiologilaboratoriet.

Blandt mikroorganismer, der kan vokse i agarmediet blod er: strenge aerobe bakterier, fakultativt, mikroaerofile, anaerobe, Gram positiv eller Gram-negative bakterier hurtigt voksende eller langsomt voksende.

Nogle bakterier, der er krævende eller irriterende fra næringsmæssigt synspunkt, såvel som svampe og gær, vokser også. Ligeledes er det nyttigt at subkulturere eller genaktivere stammer, som er meget svage metaboliske.

Valget af blodtype og baseagar varierer imidlertid afhængigt af den sandsynlige mikroorganisme, der mistænkes for genopretning, og hvilken plaque der skal anvendes (kultur eller antibiogram)..

Valg af blodtype

Blodet kan være lam, kanin, hest eller menneske.

Den mest anbefalede er lammet blod, med nogle undtagelser. For eksempel at isolere Haemophilus arter, hvor det anbefalede blod er hest eller kanin, da lammets blod har enzymer, der hæmmer faktor V.

Den mindst anbefalede er mennesket, men det er det mest anvendte, måske fordi det er det nemmeste at opnå. 

Blodet skal defibrineres, opnås uden nogen form for additiv og fra raske dyr. Til brug af humant blod skal flere faktorer tages i betragtning:

Hvis blodet kommer fra personer, der har lidt bakterielle infektioner, vil de have specifikke antistoffer. Under disse forhold er væksten af ​​nogle bakterier sandsynligvis hæmmet.

Hvis det er hentet fra blodbanen, indeholder det citrat, og det er muligt, at visse bakterier ikke udvikler sig i dets nærværelse. På den anden side, hvis blodet kommer fra patienter, der tager antibiotika, kan væksten af ​​modtagelige bakterier hæmmes.

Og hvis blodet er fra en diabetiker, forstyrrer overskydende glukose den korrekte udvikling af hæmolysemønstre.

Valg af base agar type

Basaragar anvendt til fremstilling af blodagar kan være meget bred. Blandt dem, de er: næringsstof agar, hjerne hjerte infusion agar, trypticasesojaagar, Mueller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar agar Brucella, Campylobacter agar, etc..

Anvendelse af blodagar i overensstemmelse med basismediet anvendt til dets fremstilling

Næringsstof agar

Denne base er den mindst anvendte, fordi den vokser primært ikke-krævende bakterier, såsom enteriske baciller, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, blandt andre. Det anbefales ikke at isolere Streptococcus.

Heart Brain Infusion Agar (BHI)

Det er en af ​​de mest anvendte som grundlag for blodagar, fordi det har de nødvendige næringsstoffer til væksten af ​​de fleste bakterier, herunder Streptococcus sp og andre krævende bakterier. Selvom det ikke er hensigtsmæssigt at observere mønstre af hæmolyse.

Lammet blod bruges normalt med denne base.

Der kan også fremstilles blod agarvarianter, hvor andre forbindelser tilsættes for at isolere visse mikroorganismer. For eksempel tjener hjernehjerteinfusionsagar suppleret med kaninblod, cystin og glucose, til isolering Francisella tularensis.

Med cystint Tellurit er nyttig til isolering af Corynebacterium diphteriae. Du kan bruge humant eller lam blod.

Med den første ser beta-hæmolysen ud som en smal halo, mens den anden i halo vil være meget bredere.

Ligeledes anvendes denne base sammen med bacitracin, majsstivelse, hesteblod og andre berigelsestilskud (IsoVitaleX) til isolering af slægten Haemophilus sp fra respiratoriske prøver.

Også, hvis der tilsættes kombinationen af ​​antibiotika chloramphenicol - gentamicin eller penicillin - streptomycin hesteblod, er det ideelt til isolering af patogene svampe krævende, endog bedre ydeevne til Sabouraud glucose agar. Det er især nyttigt i isoleringen af Histoplasma capsulatum.

Tryptive sojabønne

Denne base er den mest anbefalede til en bedre observation af mønsteret af hæmolyse og udførelsen af ​​diagnostiske test såsom taxa af optokin og bacitracin. Det er den klassiske blodagar, der bruges rutinemæssigt.

Med denne base kan du også forberede den særlige blodagar til Corynebacterium diphteriae, med tellurcystin og blod af lam.

På samme måde er kombinationen af ​​denne agar med lammeblod plus kanamycin-vancomycin ideel til vækst af anaerobe, især Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Denne base suppleret med blod anvendes til at udføre antibiotika af krævende mikroorganismer, såsom Streptococcus sp.

Det er også nyttigt til isolering af bakterier som Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Dette medium er ideelt som en base for blodagar, når Neisseria-slægten er mistænkt, især Neisseria meningitidis, som N. gonorrhoeae vokser ikke på blod agar.

Det tjener også til at udføre modtagelsestests til Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Denne base er fremragende til såning af prøver af gastrisk biopsier på jagt efter Helicobacter pylori.

Mediet blev fremstillet ved tilsætning 7% defibrineret fåreblod med antibiotika (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B og cefsulodin) for at begrænse væksten af ​​andre bakterier, der kan være til stede.

Denne samme base suppleret med humant eller lammeblod, nalidixinsyre og colistin er nyttigt til isolering Gardnerella vaginalis. Det er også ideelt til evaluering af antimikrobiel modtagelighed for antibiotika af samme mikroorganisme.

Derudover anvendes den til fremstilling af blodagar til dyrkning af anaerober, tilsætning af aminoglycosider og vancomycin.

Denne base giver os mulighed for korrekt at observere mønstrene af hæmolyse.

Brucella Agar

Dette medium, der anvendes som basis for blodagar sammen med tilsætning af K-vitamin, er ideel til dyrkning af anaerobe bakterier. I dette tilfælde anbefales brug af lamblod.

Campylobacter agar

Campylobacter Agar suppleret med 5% fårblod og 5 antibiotika (cefalotin, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B og vancomycin) er det medium, der bruges til at isolere Campylobacter jejuni i afføring prøver.

forberedelse

Hvert kommercielt hus bringer bagsiden af ​​pakken vejledningen til at forberede en liter kulturmedium. De tilsvarende beregninger kan fremstilles for at forberede den ønskede mængde ifølge den valgte baseagar.

Vejes og opløses

Basar agar kommer dehydreret (pulver), så det skal opløses i destilleret vand indstillet til pH 7,3.

Mængden angivet med den valgte baseagar er vejet og opløst i den tilsvarende mængde vand i en fiola, derefter opvarmet til en moderat varme og blandet med roterende bevægelser, indtil alt pulveret er opløst..

sterilisere

Efter opløsning steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 20 minutter.

Aggregeret af blod

Når du forlader autoklaven, lad fiolaen køle ned, indtil temperaturen svinger mellem 40 og 50 ° C; er en temperatur, som menneskets hud understøtter, og agaret har endnu ikke størknet.

Til dette er vienet berørt af hånden, og hvis varmen er tolerabel, er den den ideelle temperatur for at tilsætte den tilsvarende mængde defibrineret blod (50 ml pr. Liter agar). Bland forsigtigt til homogenisering.

Gennemgangen af ​​blodets aggregat er afgørende, for hvis det er gjort, når mediet er meget varmt, vil de røde blodlegemer bryde og mediet ikke tjener til at observere hæmolyse.

Hvis det tilsættes for koldt, vil der blive dannet klumper, og overfladen af ​​mediet vil ikke være glat for at gøre fløjten korrekt.

Hæld i petriskåle

Serveres i sterile petriskåle umiddelbart efter homogenisering af blodet. Ca. 20 ml hældes i hver petriskål. Denne procedure udføres i en laminær strømningshætte eller i nærheden af ​​lighteren.

Når der serveres blodagar i Petriskålene, må der ikke være luftbobler på overfladen af ​​pladen. Hvis dette sker, sendes Bunsen-brænderens flamme hurtigt over pladen for at fjerne dem..

Pladerne får størkne og opbevares i køleskab (2-8 ° C) inverteret, indtil de anvendes. Før du bruger blod agarpladerne skal deformeres (lad dem tage stuetemperatur), der skal sås.

De tilberedte plader varer ca. 1 uge.

referencer

1. Bayona M. Mikrobiologiske betingelser for dyrkning af Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.
3. "Agar blod". Wikipedia, Den frie encyklopædi. 10. december 2018, 14:55 UTC. Dec 27 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Tilgængelig på: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..