Soja agar tripticaseína foundation, forberedelse og anvendelser

den trypticasein soja agar eller trypticase soja agar er et fast, ikke-selektivt og nærende dyrkningsmedium. Den er betegnet med bogstaverne TSA for dens akronym i engelsk Trypticase Soy Agar. Den består af triptein, sojapepton, natriumchlorid og agar-agar.

På grund af sin høje næringsevne er den ideel til dyrkning af moderat krævende og ikke-krævende mikroorganismer. Mediet uden ekstra kosttilskud anbefales ikke til primære kulturer, men det er meget nyttigt til subculturing rene stammer og holder dem levedygtige blandt andre anvendelser.

Også denne agar tjener som grundlag for udarbejdelse af rige medier som blod agar, især når det er nødvendigt at overholde de mønstre af hæmolyse og til montering taxa optochin og bacitracin, der kræves i diagnosen af Streptococcus pneumoniae og Streptococcus pyogenes henholdsvis.

Desuden, når kombineret med antibiotika er det nyttigt at isolere og strenge fakultative anaerobe mikroorganismer af klinisk betydning fra prøver med blandet flora.

Endelig opfylder sammensætningen af ​​tripticasein soja agar og dens præstationer kravene fastsat af de forskellige farmakopier (europæisk, japansk og nordamerikansk).

indeks

• 1 Foundation
• 2 Fremstilling
  • 2.1 Tripticasein soja agarplader
  • 2.2 Tripticasein soja agarplader suppleret med blod
  • 2.3 Tripticasein soja agarplader suppleret med opvarmet blod
  • 2.4 Wedges af tripticasein soja agar
• 3 anvendelser
• 4 Frø
• 5 Kvalitetskontrol
  • 5.1 Sterilitetskontrol
  • 5.2 Vækst kontrol
  • 5.3 Kontrol af vækst og mønster af hæmolyse af tripticasein soja agar suppleret med blod
• 6 referencer

fundament

For en korrekt udvikling af bakterier er det nødvendigt at tilstedeværelsen af ​​energibidrag, såsom aminosyrer, vitaminer, purinbaser og pyrimidiske.

På denne måde giver triptein og sojapepton disse næringsstoffer til mikroorganismer, hvilket tillader deres fulde udvikling. For krævende bakterier er det imidlertid nødvendigt at supplere dette agar med defibrineret blod eller opvarmet blod for at øge dets berigelse.

På den anden side bliver antibiotika tilsat til mediet, bliver det et selektivt medium. Du kan også tilføje 0,6% gærekstrakt til fordel for isolering af arter af slægten Listeria, mens du tilføjer cystint Tellurit og Lam blod er ideel til Corynebacterium diphteriae.

Endelig giver natriumchlorid den osmotiske balance til mediet, og agar giver den faste konsistens.

forberedelse

Tripticasein soja agar plader

For at fremstille trypticasein soyagar bør 40 gram af det dehydrerede kommercielle medium vejes i digital skala. Opløses i en liter destilleret vand indeholdt i en fiola.

Blandingen får stå i 5 minutter og bringes derefter til en varmekilde for at hjælpe med opløsningen af ​​mediet. Det bør omrøres ofte og lade koge i 1 eller 2 minutter. Derefter steriliseres mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Lad afkøle til 50 ° C og fordel i sterile petriskåle. Lad størkne, invertere, bestille i plaquers og opbevare i køleskab.

Den endelige pH af mediet bør være 7,3 ± 0,2.

Det skal tages i betragtning, at farven på det dehydreret kulturmedium er lys beige og skal opbevares mellem 10 og 35 ° C på et tørt sted.

For den del er den forberedte agar lysegul. Forberedte plader skal opbevares i køleskab (2 til 8 ° C) indtil brug.

Pladerne skal nå stuetemperatur, inden de anvendes.

Tripticasein soja agarplader suppleret med blod

Blodagar fremstilles ved tilsætning af 5% defibrineret blod på tidspunktet for afkøling af trypticasein soja agar ved 50 ° C. Blandingen homogeniseres ved at rotere med blide bevægelser.

Server i de sterile petriskåle. Farven på mediet skal være kirsebærrød.

Tripticasein soja agarplader suppleret med opvarmet blod

Til fremstilling af blodagarbase TSA er nødvendigt for at gennemføre de ovenfor beskrevne procedurer, men forlader autoklaven henstår, indtil temperaturen af ​​mediet er ca. 56 til 70 ° C. På det tidspunkt placeres blodet og blandes, indtil mediet bliver brun.

Serveres i sterile petriskåle. Mediumets farve er chokoladebrun.

Wedges af tripticasein soja agar

Fremstillingsprocessen af ​​agaren er som beskrevet for plader, med den forskel, at i stedet for at tjene medium på petriskåle, fordelt mellem 10 til 12 ml rør med låg Bakelit inden autoklavering.

Efterfølgende autoklaveres rørene ved 121 ° C i 15 minutter. Når de forlader, læner de sig ved hjælp af en støtte og tillader sig at størkne.

De forberedte kiler bliver sådd af overflade og tjener til at opretholde bestemte ikke-krævende levedygtige mikroorganismer i en bestemt tid.

applikationer

Trypticasein soja agar anvendes i følgende tilfælde:

-Som grundlag for at forberede den klassiske blodagar, der anvendes rutinemæssigt i de fleste laboratorier.

-Isoleringen af ​​krævende bakterier.

-Observation af mønsteret af hæmolyse.

-Udførelse af diagnostiske tests.

-Som grundlag for at forberede special blod agar til Corynebacterium diphteriae, med tellurcystin og blod af lam.

-Som grundlag for fremstilling af lammeblodagar, kan mere kanamycin-vancomycin til vækst af anaerobe, især Bacteroides sp.

-Til vedligeholdelse af ikke-krævende stammer (Bacterioteca).

-Mikrobiel aerob tælling i det mikrobielle grænsestudie af vand, miljø, mad og kosmetikprøver.

plantet

Prøver kan podes direkte på overfladen af ​​trypticasein soja agar suppleret med blod eller andre additiver. Det er sået af udmattelse.

Mens tripticasein soja agarplader uden tilsætningsstoffer generelt anvendes til subkultur mikrobielle stammer (bakterier eller gær).

Kvalitetskontrol

Sterilitetskontrol

At kontrollere steriliteten af ​​de forskellige medier fremstillet med sojaagar trypton basis anbefales, at: hver forberedt batch skal inkuberes 1 eller 2 ikke-podede plader eller rør ved 37 ° C i 24 timer for at bevise sterilitet. I alle tilfælde skal det forblive uden vækst.

Hvis der er fundet forurening, skal hele partiet kasseres.

Vækst kontrol

For at studere korrekt funktion af trypticasein soja agar kan følgende bakteriestammer anvendes: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 og Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Stammerne såes og inkuberes i aerobiosis ved 37 ° C i 24 timer.

I alle tilfælde skal væksten være tilfredsstillende.

Du kan også bruge svampe som komplekset Candida albicans ATCC 10231 og Aspergillus niger ATCC 16404. God vækst forventes for begge stammer.

Vækst kontrol og hæmolyse mønster af tripticasein soja agar suppleret med blod

For at verificere den korrekte funktion af blodagar, der er fremstillet med denne base, kan følgende stammer anvendes: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 og Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

De såres og inkuberes ved 37 ° C i mikroaerophilicus i 24 timer.

I alle tilfælde skal væksten være tilfredsstillende under hensyntagen til, at i S. pyogenes beta-hemolyse (klar halo omkring kolonien) og i begge stammer af S. pneumoniae alfa hæmolyse (grønlig halo omkring kolonierne) bør observeres.

referencer

1. Wikipedia bidragsydere. Trypticase Jeg er agar. Wikipedia, den frie encyklopædi. 17. december 2018, 15:47 UTC. Tilgængelig på: https://en.wikipedia.org
2. Laboratorier Britania. Trytine soja agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Sojabønne triptych. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial.
5. BD Laboratories Trypticase Jeg er agar. 2014. Tilgængelig på: .bd.com