Agar TCBS fundament, forberedelse og brug



den TCBS agar er et stærkt selektivt og differentielt fast kulturmedium, der anvendes til isolering og kultur af Vibrio-bakterier, især Vibrio cholerae, V. vulnificus og V. parahaemolyticus som store patogener af denne slægt.

Akronymet TCBS betyder thiosulfatcitratgalls sucrose. Denne agar er også kendt som det selektive medium til Vibrios. Den oprindelige formel blev oprettet af Nakanishi og senere ændret af Kobayashi.

Det er sammensat af gærkstrakt, kødpepton, tripentin, natriumcitrat, natriumthiosulfat, oxgald, saccharose, natriumchlorid, ferriccitrat, bromthymolblåt, thymolblåt og agar.

Denne sammensætning muliggør en passende udvikling af Vibrio-arterne fra vand, afføring og fødeprøver; bortset fra Vibrio hollisae, det vokser ikke i dette medium. Derudover er TCBS-mediet i stand til at hæmme væksten af ​​andre ledsagende bakterier, især coliformer.

På grund af de alvorlige gastrointestinale og ekstra-intestinale problemer, som nogle arter af slægten Vibrio producerer, er deres diagnose meget vigtig. Mennesket er inficeret hovedsageligt ved forbrug af rå eller undercooked havemad eller forurenet vand, men også gennem infektion af sår.

På grund af dette bør kliniske laboratorier indbefatte TCBS-agar i undersøgelsen af ​​afføringskulturer af prøver af flydende afføring, især med udseendet af risvand. Især hvis patienten rapporterer at have været i kontakt med havvand eller har spist fisk og skaldyr.

indeks

  • 1 Foundation
  • 2 Fremstilling
  • 3 Brug
  • 4 Frø
  • 5 begrænsning
  • 6 Kvalitetskontrol
  • 7 referencer

fundament

Gærekstrakt, kødpeptoner og triptein er næringsmiddelkilden til dette medium. TCBS agar er imidlertid et ufrivilligt medium for de fleste bakterier.

Dens høje selektivitet er givet ved tilsætning af natriumcitrat og oxgald; begge er hæmmende midler, der også tilvejebringer en alkalisk pH til mediet, begrænser væksten af ​​den ledsagende flora og favoriserer væksten af V. cholerae, blandt andre arter. Det skal bemærkes, at Vibrio cholerae er meget følsom overfor halsbrand.

Natriumchlorid afbalancerer sig osmotisk for mediet. Derudover virker det som et hæmmende middel, da koncentrationen er høj, hvilket favoriserer væksten af ​​halofile bakterier.

Saccharose er det fermenterbare sukker, som sammen med de blå pH-indikatorer for bromothymol og thymolblåt giver differentieret karakter til mediet. Af denne grund betyder det med denne, at det er muligt at differentiere saccharose fermenteringsstammer fra ikke-fermenterende stammer.

Kolonierne af sucrose fermenterende stammer udvikler en gul farve og vil ændre mediet fra grønt til gul på grund af produktionen af ​​syrer. De ikke-fermentorer vokser gennemskinnelige og mediet forbliver den oprindelige farve (grøn).

Ligeledes indeholder dette medium natriumthiosulfat som en kilde til svovl og ferriccitrat som et afslørende middel. Begge viser bakterierne i stand til at producere hydrogensulfid (farveløs gas). H2S er dannet ud fra thiosulfatet og senere omsætning med ferriccitrat dannes et synligt sort bundfald.

Endelig er agar hvad der giver den faste konsistens til mediet.

forberedelse

Vægt 89 g af det dehydreret medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Hjælp opløsning ved opvarmning og hyppig omrøring. Blandingen kan koges i 2 minutter.

Dette medium autoklaver ikke. Efter opløsningen serveres den direkte på sterile plader. Når de størkner, arrangeres de på en omvendt måde i plaque beslutningstagere og opbevares i køleskab (2-8 ° C), indtil de anvendes.

Mediet efter tilberedning bør være ved pH 8,6 ± 0,2.

Farven på det dehydrerede medium er lys beige eller grønlig-beige, og mediet er farvet skovgrøn eller blågrøn.

Det er vigtigt at lade pladerne hærde, før prøverne såres.

brug

Den mest almindelige prøve til isolering af Vibrios er diarréstole.

Afføringsprøver, hvis de ikke kan podes straks på det selektive medium, skal transporteres midt i Cary Blair.

For at øge kulturens følsomhed kan fæcesen passeres gennem peptonvand ved pH 8,4 som et berigelsesmedium i maksimalt 8 timer, hvorfra det subkultiveres til TCBS-mediet..

Det skal også tages i betragtning, at nogle stammer af Vibrios kan forårsage septikæmi hos immunsupprimerede patienter, så de kan isoleres fra blodkulturer. På samme måde kan prøver af vand og mad fra havet analyseres, når der er epidemieudbrud af kolera sygdom.

plantet

Inokulumet af prøven under undersøgelse skal være fremtrædende, såningen udføres ved fremgangsmåden til striering ved udmattelse. Pladerne inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiosis.

De formodede kolonier af Vibrio cholerae De er mellemstore, glatte, uigennemsigtige, med tynde kanter og gule, fordi de gærer saccharose..

På en lignende måde, arten af V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii og nogle V. vulnificus. Andre arter af Vibrios klinisk vigtige som V. parahaemolyticus Gær ikke saccharose, udvikler som olivengrønne kolonier.

På den anden side skal vi huske på, at nogle stammer af Aeromonas og Plesiomonas, der er oxidase (+), kan vokse i dette medium, der udvikler gule kolonier, der kan forvirre klinikeren. Mens nogle stammer af Pseudomonas også oxiderer (+) som grønne kolonier såvel som V. parahaemolyticus.

begrænsning

Oxidasetesten, der er positiv for slægten Vibrio, bør aldrig udføres fra kolonier opnået fra TCBS-agar, da det opnåede resultat vil være en falsk negativ. Forbindelserne i mediet interfererer stærkt i denne test. Derfor bør det ske fra subkulturer på blodagar.

Kvalitetskontrol

For at bevise at mediet er i god stand, er det tilrådeligt at plante kendte eller certificerede kontrolstammer og observere, om væksten opfylder de forventede egenskaber.

Til dette, stammer af:

-Vibrio cholerae - Tilfredsstillende vækst (gule kolonier, gennemskinnelig grænse).

-Vibrio parahaemolyticus - Tilfredsstillende vækst (koloni med grønt center og gennemskinnelig grænse).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tilfredsstillende vækst (gule kolonier med haloer af samme farve omkring kolonien).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - hel eller delvis hæmning (små gule eller gennemskinnelige kolonier).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- delvis eller total inhibering (blå kolonier).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Helt hæmmet.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Total eller delvis inhibering. (Små kolonier centrum grøn gennemsigtig kant).

Inkubation af et ikke-inokuleret medium bør ikke ændres.

referencer

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Tilgængelig på: f-soria.es
  2. BD Laboratory. BD. TCBS Agar 2003. Tilgængelig på: bd.com
  3. Laboratorier Britania. TCBS Medium. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS Agar. 2016. Tilgængelig på: foodafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave. Editorial Panamericana S.A. Argentina.