Agar Thayer Martin foundation, forberedelse og brug



den Thayer Martin agar Det er et meget nærende og selektivt fast medium til isolering af Neisseria meningitidis og Neisseria gonorrhoeae; begge kendt som patogene eller klinisk vigtige Neisseria.

En af de vigtigste særlige træk ved Thayer Martin agar er dets høje indhold af kosttilskud. Denne ejendom er uundværlig, fordi Neisserias er meget krævende mikroorganismer fra ernæringsmæssigt synspunkt og vokser derfor ikke i fælles medier.

På den anden side, fordi disse mikroorganismer normalt findes i ikke-sterile områder, er tilsætningen af ​​inhibitorer, der hæmmer væksten af ​​den ledsagende flora, nødvendig uden at påvirke udviklingen af ​​slægten Neisseria..

Denne agar består af GC base agar, hæmoglobin, yderligere kosttilskud og et kompleks af hæmmende stoffer (antibiotika og antifungale stoffer). Kommercielle huse sælger hvert af tillægene separat.

Prøven, der skal plantes i dette medium, afhænger af mikroorganismen, der søges. til Neisseria gonorrhoeae De ideelle prøver er vaginale og urethrale sekretioner. Mens for Neisseria meningitidis De mest anvendte prøver er CSF, pharyngeal og nasopharyngeal exudates.

indeks

  • 1 Foundation
    • 1,1 GC base agar
    • 1,2 hæmoglobin
    • 1.3 Tilsætningsstillelse
    • 1,4 inhibitorer
  • 2 Fremstilling
    • 2.1 Original Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin ændret
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 begrænsninger
  • 6 referencer

fundament

Neisserierne er mikroorganismer klassificeret som generende og derfor er deres isolering vanskelig. Af denne grund er Thayer Martín et komplekst medium, og hver af dens komponenter opfylder en funktion, der forklares nedenfor:

GC-kerneagar

GC agar indeholder proteosepepton, majsstivelse, natriumchlorid, dipaliumphosphat, monokaliumphosphat og agar-agar. Dens komponenter giver de grundlæggende næringsstoffer til mikrobiel udvikling, neutraliserer giftige fedtsyrer, bidrager til at opretholde osmotisk balance, definere pH og give solid konsistens til miljøet.

hæmoglobin

Hæmoglobin tilvejebringer faktorer V og X (henholdsvis nikotinamid adenindinukleotid NAD og hemin). Derfor vokser i dette miljø også Haemophilus-arter. Hæmoglobin kan opnås kommercielt i dehydreret form, eller friskt defibreret bovint blod kan tilsættes til mediet.

Berigelse supplement

På den anden side skal der tilsættes et berigelsestilskud til Thayer-Martin-mediumet, da næringsstoffer indeholdt i basisagaret ikke er tilstrækkelige til kravene i Neisseria-slægten..

Det mest almindeligt anvendte berigelsestilskud kaldes isovitalex. Den indeholder glutamin, adenin, NAD, cocarboxylase, guanin, ferricnitrat, p-aminobenzoesyre, vitamin B12, thiamin og glucose. Alle disse forbindelser er nødvendige for den korrekte udvikling af patogene Neisseria.

inhibitorer

Fordi det er et stærkt nærende medium, skal inhibitorer anvendes til at forhindre væksten af ​​mikroorganismer i den sædvanlige flora af området og således favorisere isolationen af ​​slægten Neisseria..

Hæmmerkomplekset er sammensat af vancomycin, colistin og nystatin. Vancomycin hæmmer væksten af ​​Gram-positive bakterier, kolistin forhindrer udviklingen af ​​gramnegative bakterier som Pseudomonas og nogle saprofytiske Neisseria og nystatin virker på gær som Candida albicans.

Imidlertid blev Thayer Martin agar modificeret; ændringerne bestod i tilsætning af trimetoprim, stigningen i mængden af ​​agar og tilsætning af ekstra glucose. Disse ændringer forbedrede signifikant genopretningen af ​​arter af Neisseria gonorrhoeae.

Det skal bemærkes, at trimethoprim hæmmer væksten af ​​Proteus-slægten og dens konsekvente dannelse af sværmende. I denne forstand er antibiotika det, der giver den selektive natur til mediet Thayer Martin.

forberedelse

Original Thayer Martin Agar

-GC Agar

Vægt 8,2 g af dehydratiseret GC-medium og suspender i 100 ml. Bland og kog i 1 minut med hyppig omrøring for at opløse i sin helhed. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

-2% hæmoglobin

Suspender 2 g dehydratiseret hæmoglobin i 2 eller 3 ml varmt destilleret vand for at danne en ensartet blanding. Tilsæt lidt efter lidt mere vand for at fuldføre et volumen på 100 ml. Suspensionen skal være homogen inden sterilisering.

Steriliser i autoklav i 15 minutter.

-Berigelse supplement

Rekonstituer den kommercielle vej med fortyndingsmiddelet fra det samme kommercielle hus. Bland godt. Mængden af ​​fortyndingsmiddel, som skal anvendes, angives i sætsanvisningen..

-Inhibition supplement V.C.N (vancomycin, colistin, nystatin)

Reconstitute hætteglasset med det fortyndingsmiddel, der leveres af det kommercielle hus. Bland godt. Mængden af ​​fortyndingsmiddel, som skal anvendes, angives i sætsanvisningen..

-fremstillet

For hver 100 ml GC-agar fortsæt som følger:

Når de forlader autoklaven GC agar, afkøles til en temperatur på 50 ° C og tilsætning af 2 ml af hæmoglobinopløsningen fremstillet, supplement 2 ml berigelse (isobitalex eller britalex), og 2 ml supplement inhibering. Bland og hæld i sterile petriskåle.

Tillad at størkne og opbevare i køleskab indtil brug.

Farven af ​​det tilberedte medium er kirsebærrød. Den endelige pH i mediet er 7,2 ± 0,2

Ændret Thayer Martin Agar

Vægt 8,2 g af dehydratiseret GC-medium og suspender i 100 ml. Tilsæt 1 g agar og tilsæt 0,3 g glucose. Bland og kog i 1 minut med hyppig omrøring for at opløse i sin helhed. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Klargør hæmoglobin og berigelsestilskud som beskrevet ovenfor.

Det anvendte inhiberingssupplement er V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

-fremstillet

Fortsæt som beskrevet for den originale Thayer Martin agar.

brug

Thayer Martin agar bør tempereres, før prøverne såres. De almindeligt anvendte prøver er pharyngeal exudates, nasal exudates, vaginal, urethral og / eller rektal sekretion og CSF..

Brug frisk taget prøver og lav stærk inokul på agar. Prøverne sår direkte ved materialeudladning og derefter strieres ved udtømning på overfladen.

Plader inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i mikroerofil krukke (5% CO2). Ved slutningen af ​​inkubationsperioden undersøges pladerne for små, grå og nogle gange mukoidlignende kolonier..

Udfør Gram og bekræftende biokemiske test til mistænkelige kolonier.

Kvalitetskontrol

For at udføre kvalitetskontrollen af ​​Thayer Martin-agar kan følgende mikrobielle stammer anvendes.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 og Neisseria meningitidis ATCC 13090; I begge stammer forventes en tilfredsstillende udvikling.

Følgende stammer skal også medtages: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 og Candida albicans ATCC 10231. I alle dem forventes en total eller delvis inhibering i dette medium.

begrænsninger

-Det skal tages i betragtning, at bakterier, der er resistente over for de anvendte inhibitorer, kan vokse i mediet..

-Der er stammer af Neisseria gonorrhoeae som kan være følsom over for koncentrationen af ​​vancomycin anvendt. Af denne grund anbefales det at anvende chokoladeagar suppleret med isovitalex parallelt, men uden hæmmere.

-Der er stammer af gær, der er resistente over for nystatin, der kan vokse i dette medium og forstyrre isolationen af ​​patogene Neisseria, især gonokokker..

referencer

  1. Valtek diagnostiske laboratorier. Agar Thayer-Martin.2016. Fås i: com
  2. Laboratorier Britania. Thayer Martin Modificeret Medium. 2010. Tilgængelig på: britanialab.com
  3. Wikipedia bidragsydere. Thayer-Martin agar. Wikipedia, den frie encyklopædi. 26. oktober 2017, 16:33 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org4. Adgang til 28. februar 2019.
  4. Laboratorier Britania. GC agar. 2010. Tilgængelig på: britanialab.com.
  5. Laboratorier BBL ™ Medium berigelse til faste mikroorganismer. 1999. Fås i: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.