Agar TSI fundament, forberedelse og brug



den TSI agar eller jern tredobbelt sukker agar er et fast dyrkningsmedium, der tjener som en biokemisk test til at styre den indledende identifikation af gramnegative baciller. Den er baseret på bevis for fermenteringen af ​​de tilstedeværende sukkerarter og fremstillingen af ​​hydrogensulfid og gas.

Dens sammensætning og fundament er meget ligner Kligler-jernprøven, med den forskel, at sidstnævnte kun indeholder glucose og lactose. I stedet for, som navnet antyder, indeholder tredobbelt jernjern tre fermenterbare kulhydrater: glucose, lactose og saccharose..

Derudover har TSI-mediet fire proteinderivater, der gør det til en meget nærende agar: gærekstrakt, kødekstrakt, pepton og proteosepepton. Den indeholder også jernholdigt ammoniumsulfat, natriumthiosulfat, natriumchlorid, phenolrød og agar.

Manglende evne til en mikroorganisme til at fermentere glukosen til stede i mediet udelukker straks det fra at tilhøre Enterobacteriaceae-familien. Derfor er denne test afgørende for, hvilken identifikationsrute der skal tages for at bestemme slægten og arten.

Hvert laboratorium afgør om det virker med TSI agar eller Kligler agar agar.

indeks

  • 1 Foundation
    • 1.1 Natriumchlorid og agar
    • 1,2 pH-indikator (phenol rød)
    • 1.3 Proteinderivater (gærekstrakt, kødekstrakt, pepton og proteosepepton)
    • 1.4 Fermentering af kulhydrater (glucose, lactose og saccharose)
    • 1.5 Gasproduktion
    • 1.6 Natriumthiosulfat og jernholdigt ammoniumsulfat (produktion af hydrogensulfid)
  • 2 Fremstilling
  • 3 anvendelser
  • 4 Frø
  • 5 begrænsninger
  • 6 referencer

fundament

Hver af forbindelserne opfylder en funktion inden for mediet.

Natriumchlorid og agar

Natriumchlorid er nødvendigt for at opretholde den osmotiske ligevægt i mediet. Mens agar giver den faste konsistens.

PH indikator (phenol rød)

PH i det fremstillede medium er afbalanceret til 7,3, og pH-indikatoren (fenolrød) bliver gul under 6,8. Dette betyder, at små mængder syre, der er produceret ved fermentering af sukkerarter, vil ændre mediet fra rød-orange til gul.

Hvis der ikke forekommer gæring, vil der være alkalisering af mediet ved brug af peptonerne, der vender fra rød-orange til stærk rød.

Proteinderivater (gærekstrakt, kødekstrakt, pepton og proteosepepton)

Når bakterierne metaboliserer de proteiner, der er til stede i TSI-agaren, produceres aminer, der alkaliserer mediet (hovedsageligt på skråniveauet), fordi reaktionen har brug for ilt. Aminerne drejer formen til stærk rød.

Men dette vil afhænge af bakteriers evne til at fermentere kulhydrater eller ej.

Fermentering af kulhydrater (glucose, lactose og saccharose)

Undersøgelsen af ​​fermentering af sukkerarter kan give flere billeder, og hver enkelt tolkes forskelligt. Fortolkningen af ​​testen fordeler mikroorganismerne i 3 kategorier: fermentorer uden glukose, ikke-lactose fermentorer og lactose / saccharose fermentorer.

Det skal bemærkes, at mængden af ​​glucose i mediet er begrænset, mens koncentrationen af ​​lactose og saccharose er 10 gange højere.

Bakterierne fra Enterobacteriaceae-familien og andre glukose-fermenterende mikroorganismer vil begynde at fermentere dette sukker, fordi det er det enkleste kulhydrat til energi..

På den anden side er lactose og saccharose komplekse kulhydrater, der skal nedbrydes og omdannes til glukose, så de kan komme ind i Embden-Meyerhof-cyklusen.

-Ikke-fermenterende glucosemikroorganismer

Når den podede mikroorganisme ikke er i stand til at fermentere glukose, kan meget mindre gæring andre kulhydrater. Derfor dannes der ikke syrer her, men der er dannelse af aminer i skråningen på grund af brugen af ​​peptoner.

I dette tilfælde vender skråningen til en stærkere rød og bunden af ​​røret kan forblive uændret eller kan også alkaliseres, hvilket efterlader hele det røde rør.

Fortolkning: K / K betyder alkalisk skråning / alkalisk eller neutral baggrund

På billedet, der er i starten af ​​artiklen, se billedet af rør D.

Dette resultat indikerer, at mikroorganismen ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien.

-Ikke-fermenterende mikroorganismer af lactose / saccharose

Hvis bakterierne er i stand til at fermentere glucose, men ikke lactose eller saccharose, vil følgende ske:

Bakterien vil forbruge hele glukosen til stede efter ca. 6 til 8 timer, at være i stand til at syrne både skråningen og tacoen; det vil sige, at agaren er blevet helt gul. Men når glukose er udtømt og manglende evne til at anvende lactose og saccharose, vil bakterierne begynde metabolismen af ​​proteiner.

Denne reaktion har brug for ilt, derfor forekommer nedbrydning af peptonerne på overfladen (skråning). De frembragte aminer alkaliserer beslaget ved at blive gul til rød. Denne reaktion er påvist ved inkubation fra 18 til 24 timer.

Fortolkning: K / A betyder alkalisk skråning og syre taco.

På billedet, der er i starten af ​​artiklen, se billedet af rør B.

-Lactose / sucrose fermenterende mikroorganismer

Det er klart, at mikroorganismer, der er i stand til at fermentere lactose og saccharose, kan fermentere glucose. Efter den minimale mængde af glucose til stede i mediet er opbrugt, det dannede pyruvat begynder at metabolisere til dannelse syrer gennem aerob Krebs cyklus, og perioden for 8 til 12 timer alt medium er gul.

Hvis bakterierne kan splitte laktose eller saccharose, vil syrer fortsætte med at blive produceret, og efter 18 til 24 timer forbliver hele røret - næb og taco - gult.

Det skal bemærkes, at brugen af ​​glucose sker på to måder: den ene i aerob form i rørets kant og den anden anaerobt i bunden af ​​røret.

Fortolkning: A / A betyder sur ledning / syre bund. Det kan præsentere gas eller ej.

På billedet, der er i starten af ​​artiklen, se billedet af rør A.

Gasproduktion

Nogle mikroorganismer er i stand til at producere gas under fermentering af sukkerarter. Gassen ses i røret ved det tryk, den udøver i agaret. Trykket bevirker dannelsen af ​​bobler eller agarens forskydning. Nogle gange kan dannelsen af ​​gas bryde mediet.

Det er vigtigt, at på tidspunktet for såning af TSI-mediumet, bliver punkteringen renet centralt i agar indtil det når bunden. Hvis punkteringen omdirigeres mod rørets vægge, kan den forårsage falske positive i produktionen af ​​gassen, da den vil komme ud gennem den forkert dannede kanal.

Gasproduktion og de reaktioner, der foregår i ringen agar, brug oxygen, derfor anbefales det, at røret er sat med bomuldsprop, og hvis der anvendes Bakelit cap, bør dette ikke indstilles fuldstændigt.

Gasproduktionen er rapporteret som positiv (+) eller negativ (-).

Natriumthiosulfat og jernholdigt ammoniumsulfat (produktion af hydrogensulfid)

Bakterier, der er i stand til at producere hydrogensulfid (farveløs gas), tager svovl af natriumthiosulfat til stede i mediet. Når H er dannet2S reagerer med jernholdigt ammoniumsulfat, der producerer jernsulfid (sort bundfald klart synlig).

Produktionen af ​​H2S er rapporteret som positiv (+) eller negativ (-).

På billedet, som er i starten af ​​artiklen, se billedet af røret C.

forberedelse

Væg 62,5 g af dehydreret triplesukker (TSI) agar og opløs i 1 liter destilleret vand.

Varm, indtil agaren er helt opløst. Kog i et minut omrøring ofte. Fordel 4 ml mediet i 13/100 reagensglas med bomuldslåg.

Steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og lad hvile på en skrå måde. Man skal være opmærksom på, at både bunden og beslaget har samme afstand.

Opbevares i køleskab 2-8 ° C. Tillad til temperament før plantning af bakteriestammen.

Farven på det dehydrerede medium er lys beige, og det fremstillede medium er rød-orange

Den færdige pH-værdi af det fremstillede medium er 7,3 ± 0,2.

applikationer

TSI-testen anvendes i vid udstrækning på mikrobiologilaboratoriet. Denne test er afgørende for at styre den type test, der skal anvendes for at komme til identifikation af slægten og arten. Dens gode udførelse og fortolkning kan spare materiale og arbejde.

Hvis resultatet er en TSI K / K og cytochrom oxidase-test er positiv, er det kendt, at test til identifikation af ikke-fermentorer såsom Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia gramnegative baciller, blandt andre genrer bør anvendes. Hvis det er negativ oxidase, er det orienteret mod slægten Acinetobacter, Stenotrophomonas osv..

Men hvis du får en TSI A / A eller K / A og cytochrom oxidase testen er negativ, yderligere reducere nitrater til nitrit, har sikkerhed for, at det er en mikroorganisme, der tilhører familien Enterobacteriaceae. I dette tilfælde vil identifikationsruten blive orienteret til specifikke tests for denne gruppe af bakterier.

Desuden, hvis en K / A eller A / A billede og cytochrom test oxidase er positiv opnås, yderligere afprøvninger at ride vil være rettet mod at identificere fermenterende stammer ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien, såsom Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio og Pasteurella.

En TSI med hydrogensulfid, negativ oxidase, vil lede identifikationen af ​​følgende slægter af Enterobacteriaceae Family: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.

En TSI med skarpt eller moderat hydrogensulfid i den alkaliske skråning med en alkalisk bund og en positiv oxidase vil lede anvendelsen af ​​test til identifikation af gramnegative, ikke-fermenterende baciller, der producerer H2S, såsom Shewanella putrefaciens.

Endelig kan TSI'en anvendes til undersøgelse af produktionen af ​​hydrogensulfid i gram-positive baciller, især når det er mistænkt Erysipelothrix rhusiopathiae.

plantet

TSI-mediumet skal inokuleres med rene kolonier, isoleret i primære eller selektive kulturer. Hvis kolonien er taget fra selektive medier, der blev podet med prøver med blandet flora, skal man tage sig af at tage kun overfladen, da der i kolonniens nederste del kan være levedygtige stammer hæmmet i dette medium.

Derfor må sløjfen aldrig afkøles i et selektivt medium for derefter at tage kolonien og inokulere et TSI-medium.

Planteringen vil ske med en lige sløjfe eller nål. En punktering vil blive foretaget, idet man sørger for, at den er gennem midten af ​​midten, indtil den når bunden, og så er plantningen færdig med at inokulere overfladen på en zigzag måde. Gør ikke to punkteringer.

Inkuber ved 37 ° C i aerobiose i 18-24 timer. Fortolker på dette tidspunkt, hverken før eller efter.

begrænsninger

TSI-testen skal læses mellem 18-24 timer inkubation. En læsning før denne gang kan give en falsk positiv for fermentering A / A. Mens en læsning efter denne tid kan give anledning til et falsk negativt billede af ikke-fermentor på grund af forbruget af peptoner, der alkaliserer mediet.

referencer

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske test til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI agar." Wikipedia, Den frie encyklopædi. 10. juli 2018, 08:09 UTC. Feb 10 2019, 03:33 Tilgængelig på: en.wikipedia.org
  5. Laboratorier Britania. TSI agar (triple sukker jern agar). 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  6. BD Laboratories Trippel sukker jern agar (TSI Agar). 2003. Tilgængelig på: bd.com