Bright green agar foundation, forberedelse og brug

den lyse grøn agar det er et fast kulturmedium med en høj grad af selektivitet. Det anvendes udelukkende til isolering af stammer af slægten Salmonella, men der er nogle undtagelser, såsom typhi og paratyphi arter, der ikke vokser i dette medium.

Søgen efter slægten Salmonella er hyppig i prøver af afføring, vand eller mad. I denne forstand kan dette medium være meget nyttigt. Denne agar blev oprettet i 1925 af Kristensen, Lester og Jurgens, senere modificeret af Kauffmann.

Det er sammensat af pluripeptoner fra peptisk fordøjelse af animalsk væv og pancreatisk fordøjelse af kasein, indeholder også gærekstrakt, natriumchlorid, lactose, saccharose, phenolrød, lysegrøn og agar-agar.

Det er kendetegnet ved at være et meget ufrivilligt medium for de fleste bakterier, der favoriserer væksten af ​​Salmonella, men nogle coliformer er i stand til at opholde sig i det, udvikle sig svagt.

Det er vigtigt at fremhæve, at Shigella-slægten i dette medium ikke vokser og heller ikke Salmonella typhimurium, eller Salmonella paratyphi. Derfor, hvis det er ønsket at isolere disse mikroorganismer, skal andre midler anvendes, såsom blandt andet XLD agar..

indeks

• 1 Foundation
  • 1.1 Lys grøn agar
  • 1.2 Varianter af lyse grøn agar (BGA)
• 2 Fremstilling
• 3 anvendelser / applikationer
• 4 Kvalitetskontrol
• 5 referencer

fundament

Lys grøn agar

Hver af de komponenter, der udgør mediumet, har en specifik funktion, som bestemmer agarets egenskaber og egenskaber.

De pluripeptoner og ekstraktet af gær er kilden til næringsstoffer, hvorfra mikroorganismerne tager kvælstof og mineraler, der er nødvendige for deres udvikling. Lactose og saccharose er energikilder til mikroorganismer, der er i stand til at fermentere dem.

Den lyse grønne er det hæmmende stof, der forhindrer udviklingen af ​​gram-positive bakterier og et stort antal gramnegative mikroorganismer.

Natriumchlorid giver osmotisk stabilitet til mediet. Mens phenol rød er indikatoren for pH, bliver det farve, når det registrerer produktionen af ​​syrer fra fermentering af kulhydrater.

De ikke-fermenterende kolonier af lactose og saccharose vokser i dette medium af en hvid farve, lyserød eller gennemsigtig, på en rød baggrund. For eksempel bakterier af slægten Salmonella.

Mens laktose-fermenterende bakterier eller saccharose, der er i stand til at vokse i dette medium, udvikler de grønlig-gule eller grønlig-gule kolonier på en gulgrøn baggrund. For eksempel, Escherichia coli og Klebsiella pneumoniae.

Varianter af lyse grøn agar (BGA)

Der er andre varianter af lyse grøn agar; novobiocin green agar bright glucose (NBG) og novobiocin agar lyse grøn glycerol lactose (NBGL).

Novobiocin agar lysegrøn glucose (NBG)

Indeholder trypticase soja agar, ferric ammonium citrat, natrium thiosulfat pentahydrat, phenol rød, glucose, lyse grønne, novobiocin og destilleret vand.

Ser til isolering af Salmonella kolonier fra afføring prøver.

I dette tilfælde er lysegrøn og novobiocin de hæmmende stoffer, der forhindrer væksten af ​​gram-positive bakterier og nogle gramnegative mikroorganismer.

Natriumthiosulfat er kilden til svovl, og ferriccitrat er kilden til jern, der er både nødvendig for at afsløre produktionen af ​​hydrogensulfid gennem dannelsen af ​​et sortfældning af ferrisulfid.

Glucose er det fermenterbare kulhydrat, og fenolrødt er pH-indikatoren.

På dette medium udvikler Salmonella-kolonierne store med et sort center omgivet af en rødlig halo og efterfulgt af et klart synligt område. Nogle stammer af Citrobacter freundii producerer kolonier identiske med salmonella.

Bright green novobiocin agar glycerol lactose (NBGL)

Dette medium indeholder trypticase soja agar, ferric ammonium citrat, natrium thiosulfat, lactose, glycerol, lyse grønne, novobiocin og destilleret vand.

Forskellen på dette medium med den forrige er, at glucose erstattes af lactose og glycerol, og phenolrød anvendes ikke.

Mediet bruges også til at isolere Salmonella-arter, kolonierne udvikles sorte ved produktion af hydrogensulfid.

Kun kolonier, der ikke producerer syre fra glycerol eller lactose, opnår en H-produktion₂Det er nok, fordi den lave pH interfererer med dannelsen af ​​H₂S. Dette resulterer i farveløse kolonier for de fleste Proteus- og Citrobacter-arter.

forberedelse

-Afvej 58 gram af det kommercielt opnåede dehydratiserede medium. Tilsæt det i en liter dobbeltdestilleret vand. Bland, lad stå et par minutter og send forberedelsen til en varmekilde, indtil den opløses helt.

-Autoklav ved 121 ° C i 15 minutter må ikke overstige steriliseringstiden.

-Lad stå og server lige varm i sterile petriskåle. Den endelige pH bør være 6,9 ​​± 0,2.

-Tillad at størkne og opbevare i køleskab indtil brug. Før plantning skal pladerne tage stuetemperatur.

-Pulvermediet er grønt og klar til at tage en orange-brun eller rød-grøn farve afhængigt af pH og det kommercielle hus. En meget brun farve er vejledende, at agaren var overophedet.

-Når agar er størknet, anbefales det ikke at omarbejde, da mediet forringes.

Anvendelser / applikationer

Dette medium anvendes til søgning af stammer af slægten Salmonella fra blandt andet stoleprøver og mejeriprodukter..

Da det er et temmelig ufrivilligt miljø, er det tilrådeligt at plante et rigeligt inokulum, hvis den direkte prøve anvendes. Ellers skal præ-berigelse og berigelse af prøverne udføres før plantning i dette medium.

Da nogle stammer af salmonella hæmmes eller vokser med vanskeligheder, anbefales det at ledsage dette medium med andre selektive agar til salmonella.

Alle kolonier med karakteristisk Salmonella skal underkastes biokemiske test for endelig identifikation.

Kvalitetskontrol

For at teste det lyse grøn agarmediums funktion kan ATCC-stammer anvendes til at observere udviklingen af ​​det samme på den..

De hyppigste stammer, der anvendes til kvalitetskontrol, er: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

De første 3 skal give lyserøde eller gennemsigtige hvide kolonier på en rød baggrund. Salmonella med god udvikling og Proteus med sparsom eller regelmæssig vækst.

Klebsiella og Escherichia forventes gullige gule kolonier med gul baggrund, og i tilfælde af Shigella og Staphylococcus bør hæmmes.

Det dehydrerede medium skal opbevares ved stuetemperatur på et tørt sted, fordi mediet er meget hygroskopisk.

referencer

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Brilliant Green Agar. 2009
2. British Laboratory Bright Green Agar. 2015.
3. BD Laboratory. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial