Vogel-Johnson Agar fundament, forberedelse og anvendelse



den Vogel-Johnson agar er et solidt, selektivt og differentieret kulturmedium, specielt formuleret til isolering af Staphylococcus aureus. Dette medium blev skabt af Vogel og Johnson i 1960 fra modifikationen af ​​glycin-tellurit agar formuleret i 1955 af Zebovitz, Evans og Niven.

Modifikationen bestod i at forøge koncentrationen af ​​mannitol til stede i mediet og i inkorporering af en pH-indikator. Den nuværende formel består af triptein, gærekstrakt, mannitol, dikaliumphosphat, lithiumchlorid, glycin, phenolrød, agar, 1% kaliumtelluritopløsning og vand.

Det skal bemærkes, at der er andre midler, som, ligesom Vogel-Johnson agar, er selektive til isolering af S. aureus, såsom saltet mannitolagar og Baird Parker-agar. I den forstand kunne man sige, at fundamentet for Vogel-Johnson agar er en blanding mellem salt mannitolagar og Baird Parker-agar..

I den første kolonierne af S. aureus De skelnes ved at fermentere mannitol og dreje pH-indikatoren til gul. På den anden side i den anden S. aureus det er karakteriseret ved at reducere tellurit til tellur og danner grå til sorte kolonier. Begge egenskaber observeres i Vogel-Johnson agar.

Dette medium, som dets modparter, er nyttigt til påvisning af Staphylococcus aureus i fødevareprøver, hygiejnekontrol af industriprodukter og i kliniske prøver.

indeks

  • 1 Foundation
    • 1.1 Tilskud af næringsstoffer
    • 1.2 Selektiv effekt
    • 1.3 Differentialeffekt
    • 1.4 Osmotisk balance og størkningsmiddel
  • 2 Fremstilling
    • 2,1 1% vægt / volumen kalium tellurit opløsning
    • 2,2 Vogel-Johnson agarbase medium
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 referencer

fundament

Tilskud af næringsstoffer

Vogel-Johnson-mediumet indeholder triptein- og gærekstrakt; begge stoffer giver langkædede aminosyrer, der tjener som carbon- og nitrogenkilder, der er nødvendige for bakteriel vækst. Bakterier, der er i stand til at vokse i dette medium, vil tage næringsstoffer fra disse stoffer.

Selektiv kraft

Vogel-Johnson agar er i stand til at hæmme væksten af ​​gramnegative bakterier og endog nogle gram-positive bakterier, der favoriserer udviklingen af ​​koagulase-positive stafylokokker. De hæmmende stoffer er kaliumtellurit, lithiumchlorid og glycin.

Differentialeffekt

De stoffer, der fremstiller dette differentierede medium, er mannitol og kaliumtellurit. Mannitol er et kulhydrat, og når det gæres, produceres der syrer, der ændrer mediet fra rød til gul, hvilket sker takket være forekomsten af ​​phenol-rødt pH-indikatoren.

Mens den farveløse tellurit, når den reduceres til metallfri tellurid, tager en mørkegrå til sort farve.

den Staphylococcus aureus fermenter mannitol og reducerer tellurit til tellurium. Derfor er de typiske kolonier af S. aureus i dette medium er de grå eller sort omgivet af et gult medium.

Bakterier, der vokser i dette medium og ikke reducerer tellurit eller ferment mannitol, vil danne gennemsigtige kolonier omgivet af et rødt medium, endnu mere intens end den oprindelige farve på grund af alkalisering af mediet ved brug af peptoner..

På den anden side vil bakterier, der reducerer tellurit, men ikke fermenterer mannitol, vokse som grå eller sorte kolonier omgivet af en dyb rød farve.

Hvis mediet blev fremstillet uden tilsætning af kaliumtellurit, blev kolonierne af S. aureus de ville udvikle sig som gule kolonier, omgivet af et gult medium, såsom i salt mannitolagar.

Osmotisk balance og størkningsmiddel

Dipaliumphosphat opretholder den osmotiske balance i mediet og justerer pH til neutralitet 7.2. Mens agar giver solid konsistens til dyrkningsmediet.

forberedelse

1% kalium tellurit opløsning m / v

Denne opløsning er ikke inkluderet i det dehydrerede medium, fordi det ikke kan steriliseres i en autoklav. Af denne grund fremstilles den separat og tilsættes til det steriliserede medium.

Nogle kommercielle huse sælger klar til brug 1% kalium tellurit opløsning. Hvis du vil forberede dig i laboratoriet, fortsæt som følger:

Afvej 1,0 g kaliumtellurit og måle 100 ml destilleret vand. Opløs kalium telluritten i en del af vand, og fuldfør derefter mængden af ​​vand, indtil du når 100 ml. Steriliser opløsningen ved filtreringsmetode.

Vogel-Johnson agarbase medium

Afvej 60 g af dehydratiseret medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Blandingen opvarmes til kogning til hjælp under fuldstændig opløsning. Under opløsningsprocessen opblandes mediet ofte.

Steriliseres i en autoklav ved 15 pund tryk og 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og lad stå, indtil mediet når en temperatur på ca. 45 til 50 ° C. Tilsæt 20 ml af den tidligere fremstillede kaliumtelluritopløsning til 1%.

Bland og hæld i sterile petriskåle. Tillad at størkne og bestille inverteret i plaquers til senere opbevaring i køleskabet indtil brug.

Den færdige pH-værdi af det fremstillede medium bør være på 7,2 ± 0,2.

Inden du plantes en prøve, skal du vente, indtil pladen tager omgivelsestemperaturen.

Farven af ​​det fremstillede medium er rød.

brug

Selv om det kan bruges til isolering af S. aureus I en hvilken som helst form for prøver anvendes den hovedsagelig til mikrobiologisk analyse af farmaceutiske produkter, kosmetik og mad.

Det anbefales at inokulumet er tæt. Frø kan udføres ved striation med platin håndtag eller ved overflade med Drigalski spatel.

Pladerne inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiosis.

Kvalitetskontrol

For at udføre kvalitetskontrollen af ​​Vogel-Johnson-mediumet kan følgende kontrolstammer anvendes:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Det forventede resultat er som følger: for stammerne af S. aureus Tilfredsstillende vækst med sorte kolonier omgivet af gult medium. til S. epidermidis regelmæssig vækst med gennemskinnelige eller sorte kolonier omgivet af rødt medium.

Ligeledes for E. coli Det forventes, at der vil være total inhibering, og for Proteus mirabilis delvis eller total inhibering hvis den vokser, vil det gøre så sparsomt, og kolonierne bliver sorte omgivet af en mellem rød farve.

referencer

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel og Johnson Agar). 2006. Tilgængelig på: bd.com
  2. Laboratorier Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
  3. Laboratorier Britania. Kalium tellurit. 2015. Fås i: britania.com
  4. Himedia Laboratory. Vogel-Johnson Agar Medium. 2018. Tilgængelig på: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel-Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12. udgave, s. 502-503. Tilgængelig i: Brugere / Team / Downloads
  6. Bidragsydere til Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia til encyklopedisk livre,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Venezuelansk Standard Covenin 1292-89. (1989). Fødevarer. Isolering og tælling Staphylococcus aureus. Fås i:sencamer.gob.ve