Stain by May Grünwald-Giemsa fundament, teknik og anvendelser

den Maj Grünwald-Giemsa pletter eller Pappenheim er en teknik med differentierede Giemsa-farvning og blanding af maj Grünwald reagenser. Det anvendes til differentiering af normale og unormale blodlegemer i udtværinger af perifert blod og knoglemarv, såvel som til farvning af histologiske sektioner og cytologiske prøver.

Begge reagenser - Gemsa og May Grünwald - er afledt af Romanowsky-farvning, en teknik baseret på kombinationen af ​​syre og basiske farvestoffer.

Giemsa forbedrede teknikken ved at stabilisere blandingen af ​​eosin, methylenblåt og dets derivater med glycerol. I modsætning hertil bruger May Grünwald eosin og methylenblåt ved anvendelse af methanol som opløsningsmiddel. Denne strategiske kombination har givet gode resultater.

Mens i form af cellemorfologi observation virker på samme måde som Giemsa og Wright, denne teknik forbedrer ovennævnte tuning farvestoffer parasitter, som forårsager malaria, Chagas, leishmaniasis og trichomoniasis.

Derudover har det vist sig at være en meget nyttig teknik til den cytologiske undersøgelse af sædvæske. Det er blevet fremhævet ikke blot ved at vise de morfologiske karakteristika ved sæd, men tillader også at differentiere med stor effektivitet leukocytter, epithelceller og celler af spermatogenese.

indeks

• 1 Foundation
  • 1.1 Forskellige farvestoffer
• 2 Teknik
  • 2.1 Materialer
  • 2.2 Koncentreret farvestofopløsning maj Grünwald
  • 2.3 Koncentreret Giemsa farvestof
  • 2.4 Fremstilling af bufferopløsningen ved pH 7,2
  • 2.5 Blodsprøjtning eller knoglemarvsfarvningsprocedure
  • 2.6 Udvidet farveteknik af sædvæske
  • 2.7 Vigtige specifikationer
• 3 anvendelser
  • 3.1 Vaginal cytologi
  • 3.2 sædprøve
• 4 referencer

fundament

Teknikken følger grundlæggelsen af ​​Romanowskys pletter, hvori syrefarverne har selektiv affinitet for de cellulære basiske komponenter, og de sure komponenter tiltrækker de basiske farvestoffer.

Forklaret på en anden måde har både cellestrukturer og farvestoffer positive eller negative elektriske ladninger; lige omkostninger afviser og forskellige afgifter tiltrækkes.

For eksempel er basiske farvestoffer såsom methylenblåt positivt ladet og tiltrukket af negativt ladede strukturer. Derfor er dette farvestof pletter kerner, der er rige på DNA og RNA, der har negativt ladede fosfatgrupper.

Granulerne af de segmenterede basofiler og cytoplasmer af de mononukleære hvide blodlegemer indeholdende RNA farves også.

Ligeledes bærer syrefarvestoffet en negativ ladning, hvilket er grunden til, at det tilslutter sig positivt ladede strukturer, såsom erythrocytterne og granulerne i segmenterede eosinofiler. Hvad angår granulerne af de segmenterede neutrofiler, fixerer disse begge farvestoffer.

Forskellige farvestoffer

I denne teknik eksisterer en kombination af reaktioner mellem orthochromatiske farvestoffer og metakromatik. Orthochromatics (eosin og methylenblå) binder til cellestrukturen, som de er relaterede til og giver en stabil farve, der ikke varierer.

På den anden side varierer metakromatik (derivaterne af methylenblåt azur A og azurblå B) deres oprindelige farve, når de er bundet til den specifikke struktur, og der kan endda være en række nuancer.

Endelig kræver trinnet, der udføres af May Grünwald-opløsningen, tilstedeværelsen af ​​vand, fordi uden det vil farvestoffet trænge igennem strukturen, men vil ikke blive fikset. For at dette skal ske, skal farvestoffet blive polært eller ioniseret og således kunne udfælde og vedhæfte til beslægtede strukturer.

teknik

materialer

- Dias til dias.

- Farvebroer.

- Løsning af maj-grünwald.

- Giemsa plet.

- Destilleret vand.

Koncentreret farvestofopløsning maj Grünwald

Vi skal veje 0,25 g eosin-methylenblåt (farvestof ifølge May Grünwald) og opløses i 100 ml methanol. Blandingen blandes derefter i 1 time og henstår til hvile i 24 timer. Færdiggjort tid, det filtrerer.

At anvende teknikken til at være fortyndet farvestof May Grünwald følger: for 200 ml fortyndet farvestof 30 ml af den koncentrerede opløsning måles, 20 ml bufferopløsning tilsættes og 150 ml destilleret vand justeret til pH7.2-7.3 . Det blandes derefter og filtreres.

Koncentreret Giemsa farvestof

Vægt 0,5 g azur-eosin-methylenblåt (farvestof ifølge Giemsa), opløs i 50 ml methanol og anbring 50 ml glycerin i blandingen.

For at udføre teknikken fortyndes 1:10 med pufferopløsning og lad den hvile i 10 minutter. Det kan filtreres om nødvendigt.

Fremstilling af bufferopløsningen ved pH 7,2

De skal vejes:

- 40 mg kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4).

- 151 mg di-natriumhydrogenphosphat 12-hydrat (Na2HPO4).

Begge forbindelser opløses i 100 ml vand.

Blodsprøjtning eller knoglemarvsfarvningsprocedure

Der er to modaliteter: en klassiker og en hurtig.

Klassisk tilstand

1. Dæk udstødningerne i 2 eller 3 minutter med fortyndet maj-Grünwald-opløsning.
2. Vask med puffet destilleret vand for at fjerne den tidligere løsning.
3. Dæk med den samme pufrede vaskeopløsning og lad den stå i 1 minut. Tanken er, at det tidligere farvestof er fastgjort til strukturen, og at cellerne samtidig er hydreret.
4. Tilsæt 12 dråber fortyndet Giemsa-tinktur på det pufrede vand og blæs for at blande og homogenisere. Lad stå i 15 eller 20 minutter.
5. Vask smørene med bufferet destilleret vand og læg det for at lufttørre.
6. Fokusere og observere i et optisk mikroskop blodcellerne farvede ved hjælp af 40X objektivet. Om nødvendigt kan 100X bruges.

Hurtig tilstand

1. Dæk smødet med May Grünwald farvestof fortyndet i 1 minut.
2. Vask med pufret destilleret vand.
3. Dæk med pufret vand og lad stå i 1 minut.
4. Anbring det fortyndede Giemsa-farvestof og lad det gå i 5 minutter.
5. Vask med bufferet destilleret vand og lad det lufttørre.

De her beskrevne teknikker er en vejledende vejledning, men det skal tages i betragtning, at procedurerne og farvetiderne varierer afhængigt af det kommercielle hus, der leverer reagenserne. Det er tilrådeligt at følge de trin, der er strikt angivet af hvert kommercielt hus.

Spermvæske forlænget farvningsteknik

1- Dæk spredningen med et tyndt lag af maj Grünwald-opløsning i 4 minutter.

2- Fjern farvestoffet og vask med destilleret vand.

3- Sæt et lag fortyndet Giemsa (1:10) i destilleret vand i 15 minutter.

4- Fjern farvestoffet og vask med destilleret vand.

5- Lad tørre og observere under mikroskopet.

Vigtige specifikationer

Teknikken kræver, at reagenserne og vaskeopløsningerne har en pH justeret til 7,2-7,3, således at affiniteterne af farvestofferne for cellestrukturerne ikke forvrider og ikke varierer den endelige farve forventes.

applikationer

Denne teknik anvendes af kliniske laboratorier til at plette udstødninger af perifert blod og knoglemarv, vævssektioner og cytologier.

På det hæmatologiske område er denne teknik af vital betydning i undersøgelsen af ​​abnormiteter af celler med hensyn til form, størrelse og antal. Det er et meget værdifuldt værktøj til diagnosticering af visse sygdomme, såsom leukæmi og anæmi.

Desuden præsenterer det et fremragende værktøj, når man leder efter parasitter i de hæmatologiske felter (Plasmodium sp og Trypanosoma cruzi) eller histologisk (Leishmanias sp).

Vaginal cytologi

Hvad angår vaginal cytologi, er denne teknik særligt fordelagtig til observation af Trichomonas vaginalis. Dette er et vigtigt fund, da dets tilstedeværelse simulerer karcinombilleder in situ som derefter forsvinder, når parasitten elimineres.

Sædprøve

Det har været et ideelt redskab til undersøgelse af sædprøver, da det giver værdifulde oplysninger om sædets kvalitet.

De data, som den tilbyder, skal primært udføres med tal og morfologi, samt med de samtidige celler, der kan være til stede, og som er af vital betydning, såsom kimceller, leukocytter og epithelceller.

Med denne analyse er det muligt at beskrive abnormiteter observeret i sædcellerne i hovedet, nakke, midterstykke og hovedstykke.

Derudover kan de også hjælpe med at vise tilfælde af hæmospermi (forekomst af røde blodlegemer i sæden) og leukospermi eller pyospermi (stigning i antallet af leukocytter i sæden).

referencer

1. Costamagna S, Prado M. Validering af den friske test, May Grünwald-Giemsa og Gram farver og kulturmedier til diagnosticering af Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Fås i: scielo.
2. Merck KGaA laboratorium. Kan Grünwald eosin methylenblåt til mikroskopi.
3. "May-Grünwald-Giemsa plet." Wikipedia, Den frie encyklopædi. 15. november 2018, 14:37 UTC. 8 jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Laboratory Glass Chemicals Panreac. Reagenser til histologiske teknikker, hæmatologi og mikrobiologi. Tilgængelig på: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Anbefaling til farvning af blodudslæt til læsning af blodtællingen. National og Reference Biomedical Laboratory. Institut for Folkesundhed i Chile.
6. Sarabia L. Spermiogram ifølge WHO kriterierne. Program for anatomi og biologi af udvikling. Det medicinske fakultet University of Chile Tilgængelig på: pp.centramerica.com