Negativ farvningsfundament, teknik, fordele og ulemper

den negativ farvning Det er en særlig farve metode til at fremhæve tilstedeværelsen af ​​kapslen i nogle mikroorganismer - hovedsagelig Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae og Cryptococcus neoformans-, fra kliniske prøver eller rene kulturer.

Den direkte prøve, der almindeligvis anvendes til at anvende negativ farvning, er cerebrospinalvæsken. Denne teknik repræsenterer et hurtigt alternativ til den formodede diagnose af meningitis, især Cryptococcus neoformans.

Ligeledes kan denne plet påføres på sputum og sterile væsker generelt, såvel som på stammer opnået fra unge rene kulturer. Denne teknik bruger nigrosin eller kinesisk blæk til dens udførelse; Derfor er det en meget enkel og økonomisk metode til at anvende, der giver information om stor diagnostisk værdi på kort tid.

På denne måde kan ethvert laboratorium udføre denne farve. Selvfølgelig skal laboratoriet have et kompetent personale, der er i stand til at anerkende gærene i Cryptococcus neoformans isoleret eller spirende og differentiere dem fra leukocytter og artefakter, som prøven kan præsentere.

indeks

• 1 Foundation
• 2 Teknik
  • 2.1 Materialer
  • 2.2 Specifikationer for prøveudtagning
  • 2.3 Udførelse af teknikken med direkte prøver
  • 2.4 Udførelse af teknikken med stammer fra kultur
  • 2.5 Observation i et mikroskop
• 3 fordele
• 4 Ulempe
• 5 Væv farvning med indisk blæk
• 6 referencer

fundament

Nigrosin og indisk blæk virker på en lignende måde; Derfor kan et af de to stoffer anvendes sammenhængende.

Denne teknik kaldes negativ farvning, fordi den virker i strid med resten af ​​farvningsteknikkerne. I dette, hvad der forbliver ubestemt er den struktur, der søges, eller at du vil se; det vil sige mikroorganismerne.

Farven er derfor baseret på farvning af smørbunden i en mørk farve. I dette scenario fremhæves de afkortede strukturer i lys eller farveløs farve.

I almindelighed observeres gærne refringent, omgivet af en klar halo, der svarer til kapslen. Dette skyldes, at kinesisk blæk og nigrosin er stoffer, der ikke er i stand til at trænge ind i polysaccharidet, der danner kapslen af ​​levende mikroorganismer.

Det er værd at bemærke, at andre strukturer, som kan være til stede i den direkte prøve, såsom leukocytter eller røde blodlegemer, ikke trænger ind.

Nu, hvis mikroorganismerne er døde, kan tinkturen trænge ind i dem på en sådan måde, at denne farvning også er nyttig til at evaluere mikroorganismernes levedygtighed.

teknik

materialer

nigrosin

Nigrosinen skylder sit navn til den sorte farve, den har. Det er et syntetisk stof, der opnås ved opvarmning af blandingen af ​​organiske forbindelser - såsom nitrobenzin, anilin og anilinhydrochlorid - ved anvendelse af en katalysator (jern eller kobber) i reaktionen..

Kinesisk blæk

Kinesisk blæk er et stof, der primært anvendes af asiater til skrivning, fremstilling af kunstværker og monokromatisk maleri. Det er meget populært i den kinesiske kultur.

Det er fremstillet af blæksprutte blæk blandet med pulveriseret kul, produkt af brændingen af ​​lidt harpiksholdige træer.

Det er også muligt at forberede det fra sodens forbrænding af carbonhydrider (vegetabilske olier) sammen med en proteingelatine, der giver den den rette konsistens for at forhindre udfældning af carbonpartikler.

Specifikationer for prøveudtagning

- Kræver ikke faste.

- Prøven af ​​CSF, sputum eller steril væske skal indeholde mindst 1 ml volumen og skal overføres til stuetemperatur umiddelbart i laboratoriet.

- CSF og sterile væske prøver skal tages af en specialiseret læge.

- Det kan også være en ren kultur af en mistanke om stamme forbundet med ovennævnte patogener.

Udførelse af teknikken med direkte prøver

- Prøverne skal centrifugeres, supernatanten kasseres og sedimentet tages.

- En dråbe af det centrifugerede materiale (sediment) og en dråbe kinesisk blæk eller nigrosin placeres på et rent dias..

- Det skal blandes godt og dækkes med et dækslip, så dråben kan spredes ud som en tynd film uden at overskride kanterne.

- Derefter monteres præparatet i mikroskopet.

- Hvis præparatet er for mørkt, kan det fortyndes med vand.

Udførelse af teknikken med stammer fra kultur

- En meget lille del af en ung afgrøde tages med en såningsnål og opløses i en dråbe kinesisk blæk, der tidligere er anbragt på et rent glidestykke.

- Et dækslip placeres på toppen.

- Det observeres i mikroskopet ved 10X og derefter ved 40X.

Du kan også opløse en del af kolonien i destilleret vand, og derfra tage en dråbe og bland det med blækket. På denne måde vil præparatet ikke være så tykt, hvilket gør det muligt at observere strukturen isoleret; Hvis der er byområder, vil det ikke blive overholdt godt.

En anden metode er følgende:

- Placer en dråbe af kulturen i suspension i den ene ende af glideren.

- Anbring en dråbe nigrosin i samme ende og bland.

- Ved hjælp af et andet dias udvider du prøven som om du gjorde et hæmatologisk udtvær.

- Lad tørre og observere under mikroskopet.

Observation i et mikroskop

Først skal du fokusere med 10X objektiv for at få et bredt overblik over feltet. Efterfølgende skal du søge, hvis der er klare mellemrum; hvis der er, fokus med 40X for at se detaljerne.

fordel

- Det er nemt at udføre.

- Det er en økonomisk teknik.

- Denne metode kræver ikke, at smøret fastgøres til varme eller kemikalier; Derfor observeres mikroorganismer uden forvrængninger.

- Det friske præparat behøver ikke tørres, så det kan ses øjeblikkeligt og genererer resultater hurtigt.

ulempe

Når de er sammensat, skal de friske præparater observeres straks; Hvis de får lov til at tørre, er det ikke længere muligt at observere dem og en ny.

Væv farvning med indisk blæk

En anden funktion, som kinesisk blæk kan opfylde, er i patologielaboratorierne. Dette anvendes til vævsprøver fjernet kirurgisk for at markere marginerne af tumorresektion.

Det markerede væv sprøjtes med eddikesyre. Dette virker som en mordant og forhindrer blækket i at komme ud, når vævet udsættes for rutinemæssig behandling til biopsi-præparatet.

Proceduren består i at bade vævet i alkohol og xylen og derefter binde i paraffinvoks. Denne markering styrer patologen, når han observerer vævet, hvilket angiver, hvor margenen for kirurgisk resektion eller andre interessepunkter er.

referencer

1. "Nigrosin". Wikipedia, Den frie encyklopædi. 11. juli 2017, 22:46 UTC. 6 jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Kinesisk blæk". Wikipedia, Den frie encyklopædi. 1. oktober 2018, 03:08 UTC. 6 jan 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macias J og samarbejdspartnere. (2006). Arbejdspersonale i det selvstyrende region Extremadura. Særlig dagsorden Volumen IV. Editorial MAD. Sevilla-Spanien, s. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Specialt laboratorietekniker, af den galiciske sundhedstjeneste (SERGAS). Emne-specifik lydstyrke 2. Editorial MAD. Sevilla-Spanien, s. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologisk diagnose af Bailey & Scott. 12 udg. Argentina. Panamericana S.A Editorial